Серологические тесты позволяют обнаружить антитела к вирусным антигенам. Методы иммуноферментного анализа (ИФА) первого поколения предусматривают использование рекомбинантного антигена с100 (см. рис. 16-30, табл. 16-13). В последующих тестах использовались рекомбинантные и синтетические пептиды HCV, оказавшиеся более чувствительными и специфичными (табл. 16-14).
Методы ИФА третьего поколения основаны на использовании антигенов из сердцевинной части, а также NS3-, NS4- и М55-участков вируса [18]. Определявшиеся в тестах первого поколения антитела к с 100 появляются только через 4—6 мес, а иногда даже через 1 год после заражения. В то же время антитела к с33 появляются рано: на 11-й неделе у некоторых больных, а на 20-й неделе после начала заболевания — у всех (рис. 16-31). Однако наблюдаются ложноположительные результаты, а средний период между заражением и обнаружением антител составляет 12 нед [13]. Исследование донорской крови методом ИФА обеспечивает 100% профилактику заражения реципиентов HCV [65]. Тесты R1BA третьего поколения позволили значительно уменьшить число ложноположительных результатов [73], но полностью устранить их не удалось [19].
Рис. 16-29. Идентификация клона HCV из печени шимпанзе, инфицированной вирусом ни А ни В, способствовала разработке тестов на выявление антител |68|.
Для выявления нуклеотидных последовательностей HCV (HCV-PHK) в печени и сыворотке используется метод ПЦР с кДНК. Они присутствуют обычно у лиц с наличием анти-НСV-антител и подтверждают заразность больного [29]. Однако HCV-PHK может быть выявлена также у больных, у которых отсутствуют анти-НСV-антитела, и, следовательно, на основании только теста на анти-НСV-антитела можно недооценить распространённость HCV-инфекции. Определение HCV-PHK позволяет уточнить, являются ли анти-НСV-антитела свидетельством активной или просто перенесённой в прошлом инфекции. При ведении больных с хронической HCV-инфекцией следует опираться на определение HCV-PHK, а не на такой неспецифический показатель, как активность сывороточных трансаминаз. ПЦР— сверхчувствительный метод, однако она слишком сложна, занимает много времени, требует больших материальных затрат и не исключает несовпадения результатов разных лабораторий, что ограничивает её использование в широкой практике.
Новый количественный метод основан на амплификации сигнала разветвлённой ДНК (рДНК) [39]. Это дорогой, но общедоступный и технически более простой метод, который, однако, менее чувствителен, чем ПЦР. Тест с рДНК может быть отрицательным, несмотря на виремию [II]. Кровь для исследования берут с соблюдением всех необходимых условий, центрифугируют не позднее чем через 2 ч после образования сгустка. Сыворотку тотчас отделяют и по возможности замораживают в течение 2 ч после взятия [20]. С помощью теста рДНК на HCV-PHK у большинства анти-HCV-положительных доноров была выявлена HCV-PHK. Однако результаты этого теста не коррелировали с активностью трансаминаз [45], которая может быть нормальной даже при высоких титрах циркулирующего вируса. Уровень сывороточной HCV-PHK, определяемый методом ПЦР с рДНК, коррелирует с тяжестью гистологических изменений [45]. Метод позволяет контролировать эффективность лечения [20].
Таблица 16-13. Частота выявления (в %) анти-HCV среди доноров крови с помощью метода ИФА и дополнительных тестов [3]
Регион | Частота выявления |
Великобритания | 0,075-0,01 |
Скандинавия | 0,01-0,1 |
Северная Америка | 0,3 |
Средиземноморье | 0,67 |
Южная Америка | 2,0 |
Африка | 1,4 |
Япония | 2,2 |
Австралия | 0,06 |
Египет | |
Группы риска | |
Больные гемофилией | |
Наркоманы | |
Гомосексуалисты |
Уровень анти-HCV IgM коррелирует с активностью вирусной инфекции и биохимическими признаками активной болезни печени при острой и хронической HCV-инфекции [12, 55].
Вирус не удалось культивировать. Чувствительны к HCV лишь человек и приматы. Вирус визуализирован путём электронной микроскопии с использованием иммунологических методов исследования [34, 59].
Таблица 16-14. Результаты серологических тестов на гепатит С в зависимости от используемых белковых антигенов из различных доменов вирусного генома
Белковый антиген | Неструктурный участок clOO 5-1-1 с33 | Сердцевина с22 |
ИФА 1 RIBA 2** ИФА 2 / RIBA 4 | + + + + + +* | + |
* Появляется рано, на 11—20-й неделе. Методом ПЦР выявляется также HCV-PHK.
** Метод рекомбинантного иммуноблотинга.
Рис. 16-30. HCV является одноцепочечным РНК-содержащим вирусом, покрытым оболочкой, размерами 50—60 нм. Он имеет сердцевинный (С), оболочечный (Е) и неструктурные (Ns) домены. Показано расположение полипротеинов, кодируемых HCV. Представлено взаиморасположение отдельных вирусных белков с22, с33 и с100. Указаны предполагаемые вирусные домены, кодирующие полипротеины.
Рис. 16-31. Динамика серологических маркёров хронического гепатита С. Как видно, HCV-PHK появляется рано, до повышения активности АлАТ, и определяется в течение длительного времени. Антитела к с22/33 появляются через 12 нед, а антитела к c100 — приблизительно только через 20 нед после заражения.