Материалы и методы

Оборудование. Хроматог­ра­фичес­кое раз­де­ление про­води­ли на хро­матог­ра­фе Agilent 1260, ос­на­щен­ном че­тырех­ка­наль­ным гра­ди­ен­тным на­сосом, ав­то­сам­пле­ром, тер­моста­том ко­лонок и об­разцов, фотометрическим де­тек­то­ром; под уп­равле­ни­ем прог­рам­мно­го обес­пе­чения ChemStation (ver. B.04.03).

Для про­бопод­го­тов­ки при­меня­ли вор­текс-шей­кер Reax top (Heidolph, Гер­ма­ния), ор­би­таль­ный шей­кер (Biosan OS20, EC), цен­три­фугу SL 16 (Thermo Scientific, США). Оп­ре­деле­ние рН про­води­лось на пор­та­тив­ном рН/мВ-мет­ре рН 330i, (WTW, Гер­ма­ния). Взя­тие на­весок осу­щест­вля­ли на ана­лити­чес­ких ве­сах (A&D GR-200, Япо­ния). До­зиро­вание по объ­ему осу­щест­вля­ли при по­мощи до­зато­ров пе­ремен­но­го объ­ема «Лен­пи­пет Ди­гитал» 10-100 мкл и 100-1000 мкл (Рос­сия). Все ис­поль­зу­емые в ра­боте средс­тва из­ме­рения за­регис­три­рова­ны в Го­сударс­твен­ном ре­ес­тре средств из­ме­рений и имеют дей­стви­тель­ные сви­детель­ства о по­вер­ке.

В качестве объекта исследования использовали субстанцию и лекарственные препараты метронидазола. В данном эксперименте была использована субстанция метронидазола (ГФ РК, т. II, стр.316), соответствующая требованиям нормативного документа, ацетонитрил (gradient grade, Scharlau), вода очищенная, кислота фосфорная концентрированная (х.ч.), калия дигидрофосфат (х.ч.). Были исследованы лекарственные препараты метронидазола, в частности таблетки следующего состава: метронидазол, крахмал картофельный, желатин, крахмальный сироп, магния стеарат (АНД РК 42-980-10); гель состава метронидазол, метилпарагидроксибензоат, пропилпарагидроксибензоат, карбомер 940, пропиленгликоль, динатрия эдетат, натрия гидроксид, вода очищенная (АНД РК 42-1955-11); инфузионный раствор: метронидазол, натрия хлорид, кислота лимонная моногидрат, динатрия гидрофосфат безводный, натрия гидроксид, вода для инъекций (АНД РК 42-4185-17); суппозитории вагинальные состава метронидазол и твердый жир (АНД 42-1859-10), а также вагинальные таблетки, содержащие метронидазол, целлюлоза микрокристаллическая, повидон, кросповидон, кремния диоксид коллоидный и кислота стеариновая (АНД РК 42-3715-11).

Методика. Для при­готов­ле­ния ис­ходно­го стан­дар­тно­го рас­тво­ра 50,0 мг суб­стан­ции метронидазола вно­сили в мер­ную кол­бу вмес­ти­мостью 50 мл, растворяли в 20 мл подвижной фазы и до­води­ли объ­ем рас­тво­ра тем же рас­тво­рите­лем до мет­ки. По­лучен­ный рас­твор имел кон­цен­тра­цию метронидазола 1,016 мг/мл. Ос­таль­ные стан­дар­тные рас­тво­ры го­тови­ли пу­тем раз­ве­дения стан­дар­тно­го рас­тво­ра с кон­цен­тра­ци­ей 1,016 мг/мл во­дой (таб­ли­ца 1).

Таблица 1 - При­готов­ле­ние стан­дар­тных рас­тво­ров метронидазола

Пробоподготовку лекарственных препаратов метронидазола выполняли с учетом их физических и химических свойств [6-9].

Хро­матог­ра­фиро­вание. Хро­матог­ра­фичес­кое раз­де­ление про­води­ли на хро­матог­ра­фичес­кой ко­лон­ке Agilent Zorbax Eclipse Plus C18 4,6×75 мм, 3,5 мкм, с пред­ко­лон­кой Agilent Zorbax EclipsePlus C18 4,6×12,5 мм, 5 мкм, при тем­пе­рату­ре 20^оС.

В результате экспериментов была подобрана оптимальная под­вижная фа­за, состоящая из 0,1 М раствора дигидрофосфата калия рН 6,4 пред­ва­ритель­но про­филь­тро­ван­ной и де­гази­рован­ной на ус­трой­стве для филь­тро­вания под ва­ку­умом и аце­тонит­рил (85:15).

Хроматографирование проводилось в условиях изократного элюирования при ско­рости по­тока под­вижной фа­зы 1 мл/мин., объ­ем вво­димой про­бы составил 20 мкл., вре­мя хро­матог­ра­фиро­вания 8 мин., де­тек­ти­рова­ние при дли­не вол­ны 320 нм., вре­мя удер­жи­вания метронидазола 5,7 мин.