Робота № 4. Визначення кількості гемоглобіну

Прилади та препарати: гемоглобінометр ГС-3, очна піпетка, 0,1 н розчин HCl (децинормальний розчин соляної кислоти), дистильована вода, спирт, ефір, 5%-й спиртовий розчин йоду, вата, дефібринована кров.

Кількість гемоглобіну визначають колориметричним способом, який грунтується на тому, що досліджувану кров розбавленням доводять до забарвлення, однакового зі стандартним розчином. Прилад для визначення кількості гемоглобіну в крові називається гемоглобінометром. Дві крайні пробірки в штативі запаяні, в них міститься стандартний розчин хлориду гематину - сполука гемоглобіну з соляною кислотою. Середня проградуйована пробірка призначена для досліджуваної крові. Вона має поділки, які показують кількість гемоглобіну в грамах на 100 мл крові, тобто концентрацію гемоглобіну в грамах-процентах (г %). До приладу додається піпетка на 0,02 мл і тонка скляна паличка.

Кількість гемоглобіну встановлюють так. У середню пробірку наливають розчин децинормальної соляної кислоти, до нижньої позначки з цифрою 2 г %.

У тварин (корови, кози, собаки, кроля) дезинфікують спиртом або ефіром шкіру вуха і проколюють вушну вену, що міститься під шкірою зовнішньої поверхні вушної раковини. У капілярну піпетку набирають 0,02 мл крові, обережно всмоктуючи її через трубку з мундштуком. Обтирають ватою кров із зовнішньої поверхні кінчика піпетки, опускають піпетку в пробірку з розчином соляної кислоти так, щоб її кінчик занурився в нижній шар соляної кислоти, і обережно видувають кров. Після цього, не виймаючи з пробірки, піпетку промивають дво- чи триразовим всмоктуванням соляної кислоти з верхнього прозорого шару. Потім піпетку виймають з рідини, доторкаються нею до стінки пробірки і видувають з піпетки вміст; піпетку видаляють.

Суміш крові з соляною кислотою добре перемішують, злегка ударяючи пальцем по дну пробірки. Після перемішування кров гемолізується, рідина в пробірці стає прозорою.

Пробірку вміщують у штатив приладу і залишають там на 5 хв. За цей час червоний колір рідини переходить у коричневий (колір міцного чаю). Гемоглобін крові під дією децинормального розчину соляної кислоти перетворюється на солянокислий гематин (хлорид гематину). Через 5 хв. у пробірку краплями добавляють дистильовану воду доти, доки колір розчину буде однаковим з кольором стандарту. Добавляючи воду, розчин перемішують скляною паличкою.

Рівень розчину (за меніском) після розбавлення показує кількість (вміст) гемоглобіну в досліджуваній крові в грам-процентах (г %).

Примітка: у зв’язку з тим, що кров у капілярній піпетці швидко зсідається, можна використовувати свіжу дефібриновану кров.