Исследование агрегации нейтрофилов

Агрегацию нейтрофилов изучали путем записи кинетических кривых изменения светопропускания клеточных суспензий при 540 нм с применением компьютеризированного агрегометра АР2110 (“СОЛАР”, Минск, Беларусь). Степень агрегации определяли как максимальное значение светопропускания клеточных суспензий на агрегационной кривой после инициирования процесса агрегации [3].

Стабильность WGA-индуцированных агрегатов нейтрофилов определяли по образованию межклеточных контактов, устойчивых к действию гаптенного углевода GlcNAc [3]. Как показано на рисунке 2.2, через 4-5 мин после добавления лектина (WGA) величина светопропускания клеточной суспензии достигала максимального значения и агрегационная кривая выходила на стационарный уровень. После достижения такого динамического равновесия в суспензию клеток для индукции дезагрегационного ответа добавляли GlcNАc и в течение 5 мин продолжали непрерывную запись кинетической кривой изменения светопропускания клеточных суспензий.

Рисунок 2.2 – Кинетические кривые WGA-индуцированной агрегации нейтрофилов и их дезагрегации при действии GlcNAc (22 мг/мл) в отсутствие (1) и присутствие (2) МβCD. I и I₀ – параметры, используемые для расчета R. Нейтрофилы человека инкубировали в течение 10 мин при 37°С в присутствии MβCD (10 мМ) до внесения WGA (7,5 мкг/мл)

Для количественной характеристики стабильности агрегатов был введен параметр стабильности R, который рассчитывали по формуле:

,

где R – параметр стабильности;

I − значение светопропускания клеточной суспензии через 5 мин после добавления гаптенного углевода;

I ₀ − максимальное изменение величины светопропускания суспензии клеток в процессе агрегации.

Параметр стабильности может иметь следующие предельные значения: R = 0% – все клеточные агрегаты разрушаются под действием гаптенного углевода и R = 100% – все клеточные агрегаты полностью устойчивы и нечувствительны к действию гаптенного углевода.