Метод Обратный флуоресценции в реальном времени
Транскриптазная полимеразная цепная реакция
(RТ-ПЦР) анализ 2019 nCoV
Нуклеиновая кислота
Анализ нуклеиновой кислоты 2019- nCoV
Метод обнаружения нуклеиновых кислот, представленный в этом руководстве в основном предназначен для генов с открытой рамкой считывания (ORF lab) и генов нуклеокапсидного белка (N) в геноме 2019-nCoV.
Задача 1 (ORF lab):
Прямой праймер (F): CCCTGTGGGTTTTACACT TAA
Обратный праймер (R): ACGATTGTGCATCAGCTGA
Флуоресцентная проба (P): 5 '-FAM-CCGTCTGCGGT ATGTG G AAAGGTTAT G G-BHQ1 -3'
Задача 2 (N):
Прямой праймер (F): GGGGAACTTCTCCTGСТА GAAT
Обратный праймер (R): CAGACATTXTGCTCTCAA GCTG
Флуоресцентная проба (P): 5 ' -FAM-TTGCTGCTGCTT G ACAG ATT-TAMRA-3 '
Информацию об экстракции нуклеиновых кислот и реакции RT-PCR на основе флуоресценции в реальном времени и условиях реакции см. В инструкциях к набору соответствующих производителей.
Описание результата
Отрицательный: нет значения Ct или Ct значение 40
Положительный: значение Ct <37.
Серая зона: повторные эксперименты рекомендуются, если значения Ct находятся в диапазоне от 37 до 40. Если значение Ct показывает <40, а кривая усиления имеет очевидный пик, образец следует считать положительным, в противном случае его следует считать отрицательным.
|
|
Примечание. Если используется коммерческий набор, инструкции, предоставленные производителем, будут иметь приоритет.
Подтверждение
Лабораторное подтверждение положительных случаев требует одного из следующих двух условий:
1. Анализ RT-ПЦР на основе флуоресценции в реальном времени для 2019-nCoV в одном и том же образце показывает, что обе мишени, ORF lab и Protein N являются положительными. В случае положительного результата для одной цели, образцы/пробы должны быть повторно отобраны для другого теста. Если он остается положительным для одной цели повторно, результат следует считать положительным.
2. Анализ RT-PCR на основе флуоресценции в реальном времени для двух типов образцов показывает, что одна и та же мишень является положительной в одно и то же время, или одна мишень как положительная в двух образцах одного типа, результат следует считать положительным.
Отрицательные результаты по нуклеиновой кислоте не могут исключить инфекцию 2019 nCoV. Факторы, приводящие к ложноотрицательным результатам, должны быть исключены, включая: низкое качество образцов, например, образцы дыхательных путей ротоглотки и других частей; образцы, собранные слишком рано или слишком поздно; образцы, которые неправильно хранятся, транспортируются или обрабатываются; технические причины, такие как мутации вируса, ингибирование ПЦР и др.
|
|
Тесты на сывороточные антитела
Анализы сывороточных антител (коллоидное золото, хемилюминесценция магнитных частиц, ELISA) используются в качестве дополнительных тестов для случаев отрицательных тестов на нуклеиновые кислоты 2019-nCoV, используется в сочетании с тестами на нуклеиновые кислоты при диагностике подозрительных случаев или используется в серологических исследованиях и исследованиях воздействия на соответствующие группы населения. Лабораторно подтвержденные положительные случаи должны соответствовать одному из следующих двух условий:
1. Сывороточные IgM-антитела и / или IgG-антитела к 2019-nCoV являются положительными;
2. Антитела IgG сыворотки к 2019-nCov превращаются из отрицательных в положительные или титры антител IgG периода восстановления в 4 раза или более выше, чем в острой фазе.
Использование сыворотки в острой фазе в течение 7 дней после началa заболевания выявляет IgM и IgG, если результат теста отрицательный, рекомендуется повторный сбор для тестирования в течение 10 дней после начала заболевания. Для выявления IgG следует использовать образцы сыворотки выздоравливающего в течение 3-4 недель после начала заболевания. Следуйте инструкциям руководства производителя при использовании коммерческих наборов для тестирования.
Требования биобезопасности для