Определение концентрации общего IgE

Используют коммерческие ИФА-тест-системы, в состав которых входят планшеты для иммунологических исследований, на дне лунок которых сорбированы антитела против Ig человека (антиглобулиновая сыворотка). Тестируемые на содержание IgE сыворотки вносят в лунки планшетов и инкубируют в течение 60 мин с сорбированными антителами, затем лунки отмывают и добавляют конъюгат (меченные пероксидазой антииммуноглобулиновые антитела). Антитела связываются с IgE. Неприсоединившиеся антитела удаляют промыванием лунок, затем добавляют проявляющийся раствор, состоящий из субстрата для фермента пероксидазы – перекиси водорода и красителя (триметилбензидин – ТМБ). Пероксидаза катализирует образование из перекиси водорода активных форм кислорода, улавливаемых красителем, который придает содержимому лунки желтую окраску. Интенсивность окраски, зависящая от количества IgE, оценивается спектрофотометрически на иммуноферментном анализаторе. В данном случае мы привели описание одной из модификаций ИФА – твердофазного метода двойных антител, или «сэндвич»-метода, – двухцентрового связывания антиглобулиновых антител с IgE.

 

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ

1. Какие иммунологические тесты относят к I уровню? 

2. Какие тесты относят ко II уровню?

3. Назовите показания к проведению тестов II уровня.

4. Показатели иммунограммы, характеризующие адаптивный клеточный иммунный ответ.

5. Показатели иммунограммы, характеризующие гуморальный антигенспецифический иммунный ответ.

6. Какие иммунологические тесты дают информацию о фагоцитарном звене иммунитета?

7. Назовите минимальный спектр цитокинов, достаточных для определения функций основных звеньев иммунной системы.

8. Каковы принципы иммунофенотипирования клеток?

9. Назовите метод определения концентрации Ig трех основных классов (IgM, IgG, IgA).

10. Какой метод используют для определения IgE?

11. Охарактеризуйте сущность метода определения циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).

12. Каким методом лабораторного микроанализа исследуют цитокины (ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-8, ИЛ-10, ФНОα, ИФН-γ)?

13. Какие показатели характеризуют фагоцитарную активность нейтрофилов?

14. Назовите тест, оценивающий завершенность фагоцитоза.

15. Назовите современные методы микроанализа.

16. В чем сущность РИА?

17. Какую метку используют для оценки результатов ИФА?

18. Назовите недостатки ИФА.

19. Перечислите преимущества ИФА перед другими методами микроанализа.

20. Назовите преимущества РИА перед другими методами микроанализа.

21. Какими аппаратами пользуются для регистрации результатов РИА?

22. В какой сфере лабораторного микроанализа предпочтителен РИА?

23. Преимущественно в каких целях используют ИФА?

24. В каких случаях микроанализа предпочтение отдается иммунохемилюминесцентному методу?

25. Назовите основное отличие ПЦР от серологических методов?

26. Охарактеризуйте область применения ПЦР.

27. Что означает понятие «серологическое окно» инфекции?

28. С какого дня развития вирусного гепатита С ПЦР позволяет обнаружить инфекцию?

29. На каком сроке развития вирусного гепатита С ИФА выявляет инфекцию?

30. Как определяется иммунорегуляторный индекс?

31. Назовите способы оценки результатов реакции иммунофлуоресценции (для определения фенотипа лимфоцитов) с использованием МКАТ.

32. Охарактеризуйте понятие «CD3-антиген».

33. Что представляет собой по химической структуре CD4-антиген?

34. Что представляет собой по химической структуре CD8-антиген?

Глава 4

ВИДЫ ИММУНОПАТОЛОГИИ. ИММУНОДЕФИЦИТНЫЕ СОСТОЯНИЯ. ИММУНОСТИМУЛИРУЮЩИЕ СРЕДСТВА

Иммунопатология – раздел иммунологии, изучающий патологические состояния и заболевания, в патогенезе которых принимают участие иммунные механизмы. Иммунопатологические состояния можно разделить на следующие группы:

· иммунодефициты – снижение функции иммунной системы вследствие нарушения становления иммунной системы или воздействия повреждающих факторов;

· аллергические и аутоиммунные процессы, при которых иммунные реакции организма сопровождаются повреждением собственных тканей;

· инфекции иммунной системы с непосредственной локализацией возбудителя в иммунокомпетентных клетках          (ВИЧ-инфекция, инфекционный мононуклеоз);

· опухоли иммунной системы (лимфогранулематоз, лимфома, лимфосаркома);

· болезни иммунных комплексов;

· трансплантационная болезнь;

· иммунопатология репродукции;

· иммунопатология опухолей.

ИММУНОДЕФИЦИТЫ

Иммунодефициты делятся на две большие группы – первичные (врожденные) и вторичные (приобретенные), вызванные различными эндогенными (болезни) и экзогенными воздействиями (например, отрицательными экологическими факторами). Первичные иммунодефициты (ПИД), как правило, обусловлены генетическими дефектами и лишь иногда ненаследственными дефектами, возникшими в эмбриональном периоде.

Насчитывается 70 различных первичных дефектов иммунной системы. Некоторые ПИД встречаются довольно часто. Например, частота селективного дефицита IgA достигает 1:500. Для большинства других ПИД этот показатель составляет 1:50 000 – 1:100 000.

Первичные иммунодефициты

Классификация ПИД

В соответствии с последней классификацией ВОЗ (2004) ПИД делят на следующие группы:

1. ПИД преимущественно с дефектами антител (гуморальные иммунодефициты):

· сцепленная с Х-хромосомой агаммаглобулинемия (СХАГГ);

· общая вариабельная иммунная недостаточность (ОВИН);

· агаммаглобулинемия с нормальным или повышенным уровнем IgМ;

· селективный дефицит IgА;

· транзиторная гипогаммаглобулинемия младенческого возраста (поздний иммунологический старт).

2.  ПИД преимущественно с Т-клеточными дефектами:

· первичный дефицит CD4+-клеток;

· дефицит ИЛ-2;

· множественный дефицит цитокинов;

· дефект сигнальной трансдукции + миопатия;

· дефект инфлюкса кальция с миопатией.

3. Комбинированные иммунодефицитные состояния:

· тяжёлые комбинированные иммунодефициты (ТКИД);

· синдром Вискотта – Олдрича;

· атаксия – телеангиэктазия (Луи – Барра).

4. Дефекты фагоцитоза:

· хроническая гранулёматозная болезнь;

· синдром Чедиака – Хигаси.

5. Дефекты системы комплемента.

6. Иммунодефициты, ассоциированные с другими главными дефектами вне иммунной системы:

·        гипер-IgE-синдром (синдром Джоба);

·  хронический кожно-слизистый кандидоз;

·         кишечная лимфангиэктазия;

·        энтеропатический акродерматит.

7. Иммунодефициты, ассоциированные с лимфопролиферативными процессами.

 

Патогенез ПИД

Основной причиной ПИД являются хромосомные перестройки либо мутации генов, определяющих становление (формирование) иммунных органов и их функций в организме в процессе онтогенеза. Развитие и функционирование иммунной системы регулируется рядом генов, одни из которых (RAG-1, RAG-2, TdT) отвечают за многообразие репертуара антигенраспознающих рецепторов Т- и В-лимфоцитов – TCR и Ig, другие – за экспрессию антигенов и рецепторов на лимфоцитах (например, CD3, CD4, CD8, HLA, TCR); определены гены, контролирующие фазы клеточного цикла, а также гены, детерминирующие экспрессию рецепторов для интерлейкинов. Мутация в каждой из этих групп генов ведет к блоку становления иммунной системы на определенной стадии. Так, например, мутация генов рекомбиназ RAG-1 и RAG-2 вызывает развитие тяжелого комбинированного иммунодефицита вследствие блокады развития Т- и В-лимфоцитов на стадии, предшествующей перестройке генов антигенраспознающих рецепторов. Формирование отдельных популяций лимфоцитов блокируется при дефектности генов, определяющих экспрессию конкретных антигенов на клетках. При нарушениях в гене CD3 (дефицит CD3γ, CD3ε) расстраивается функция Т-лимфоцитов. Мутация гена CD4 приводит к дефициту CD4⁺-клеток. Причиной делеции                Т- и В-клеток могут быть мутации ферментов пуринового метаболизма – аденозиндезаминазы (АДА) и пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ). АДА катализирует превращение аденозина и дезоксиаденозина соответственно в инозин и дезоксиинозин, ПНФ – превращение дезоксигуанозина и гуанозина в гуанин, а также инозина и дезоксиинозина в гипоксантин. В отсутствие АДА накапливаются дезоксиаденозин, аденозин, дезокси-АТФ, оказывающие токсическое действие на Т- и В-клетки, что приводит к гибели этих клеток и развитию тяжелого комбинированного иммунодефицита (ТКИД). Причиной последнего могут выступать генные дефекты рецепторов для ИЛ-2, 4, 7, 9, 13, в частности мутация их общей γ-цепи (рецептор для указанных интерлейкинов состоит из двух белков – α- и γ-цепи). При дефиците ПНФ накапливаются дезоксигуанозин, ГТФ и дезокси-ГТФ, токсичные только для Т-лимфоцитов. Мутация генов CIITA, RFX-S, обусловливающая нарушение экспрессии на клетках HLA-антигенов II класса (синдром «голых» лимфоцитов), делает невозможным осуществление положительной селекции CD4⁺-клеток, и эта популяция не формируется. При мутации гена тирозинкиназы ZAP-70 блокируется развитие CD8⁺-клеток.

Дефекты антителопродукции могут быть обусловлены как нарушением становления клеток В-линии (блок дифференцировки на уровне перехода про-В-лимфоцитов в пре-В-лимфо-циты вследствие мутации гена Btk, кодирующего фермент, который называют брутоновской тирозинкиназой) при х-сцеплен-ной агаммаглобулинемии, так и дефектностью Т-клеток – снижением хелперной активности.

В отличие от приведенных генетических дефектов, обусловливающих избирательное нарушение лишь иммунной системы, известны комплексные генетические дефекты, при которых наблюдается сочетание иммунологических расстройств с неиммунологическими. Так, при синдроме Ди Джорджи наблюдается недоразвитие производных 3 - 4 жаберных щелей – тимуса, паращитовидной железы, крупных сосудов вследствие дефектности соседних генов, ответственных за развитие этих гистогенетически родственных органов. При мутации в WASp-гене (синдром Вискотта - Олдрича) наблюдается дефект цитоскелета, что приводит к развитию тромбоцитопении, экземы и комбинированного иммунодефицита.

Критерии ПИД

По инициативе JeffreyModelFoundation (США) и ESID (Европейское общество по изучению иммунодефицитов) разработаны критерии, позволяющие заподозрить наличие у пациентов ПИД:

· Частые заболевания отитом (6 - 8 раз в год).

· Частые заболевания синуситами (4 - 6 раз в год).

· Две и более подтвержденные пневмонии.

· Повторные глубокие абсцессы кожи и внутренних органов.

· Потребность в длительной терапии (более 2 мес.) антибиотиками для купирования инфекции.

· Две и более тяжелые инфекции (менингит, остеомиелит, сепсис).

· Отставание грудного ребенка в росте и массе.

· Персистирующее грибковое поражение кожи.

Обнаружение у пациента более одного из перечисленных симптомов должно насторожить в отношении ПИД и явиться сигналом для проведения иммунологического исследования.