Получение посевного материала в лабораторных условиях

Продуцентом декстрана является культура Leuconostoc mesenteroides СФ-4. Это факультативно анаэробные стрептококки. На жидкой синтетической среде образуют капсулы углеводного происхождения.

водят в два этапа.

1. Выращивание ПМ в пробирках.

Компоненты питательной среды, отвешенные на весах согласно прописи, растворяют в воде для инъекций. Массовая доля сахара в среде должна составлять (9,5±0,5)%, рН – (6,6±0,2). Среду фильтруют через двойной слой фильтровальной бумаги, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве. После стерилизации среда должна быть бесцветной и прозрачной.

Простерилизованную среду в пробирках проверяют на стерильность путем выдержки в течение 3 сут. в термостатной камере последовательно при температуре (37,0±0,5)°С, затем при температуре (24,0±0,5)°С. Среда должна оставаться бесцветной и прозрачной.

Поддержание штамма в активном состоянии производят путем пересева культуры один раз в двое суток из пробирки в пробирку на свежеприготовленную среду. Пересев производят при строгом соблюдении асептических условий в специальном боксе, предназначенном только для проведения этих работ. Культуру выращивают в термостатной камере.

Чистоту культуры проверяют один раз в неделю путем высева из пробирок с культурой в мясо-пептонный бульон и на мясо-пептонный агар и микроскопирования мазков из высевов.

Активность культуры проверяют 1 раз в месяц путем выращивания на ферментационной среде в течение 2-х суток при температуре (24,0±0,5)°С с ежедневной проверкой выхода нативного декстрана. Для дальнейшей работы используют пробирки с культурой, давшей наибольший выход нативного декстрана и отвечающей следующим требованиям:

а) внешний вид – мутная густая жидкость;

б) продуктивность штамма – не менее 38,0% к загруженному сахару;

в) морфология культуры – цепочки кокков с капсулами;

г) отсутствие посторонних микроорганизмов.

2. Выращивание ПМ в колбах.

Для выращивания ПМ в колбах вместимостью 1000 мл используют (30±6) часовую культуру Leuconostoc mesenteroides СФ-4, выращенную в пробирках, в количествах (25±1) мл на каждую колбу. Состав среды аналогичный. Посев производят в боксе в асептических условиях. Засеянную среду в колбах поме-

щают в термостат и культивируют (30±6) ч. Для засева инокулятора используют ПМ из колб в количестве 10% к объему среды в инокуляторе (3 колбы по 700 мл). ПМ в колбах должен соответствовать следующим требованиям:

а) внешний вид – мутная густая жидкость;

б) морфология культуры – цепочки кокков с капсулами;

в) отсутствие посторонних микроорганизмов.