Биопроба. Лабораторные животные к T.equigenitalis не чувствительны. В случае отрицательного результата бактериологического исследования можно использовать биопробу на кобылах. Для ее постановки берут смегму у жеребцов из уретральной ямки, уретры, препуция, пениса, у кобылы из клиторного синуса и ямки. Смегму разбавляют в 30 мл дистиллированной воды и ин окулируют при помощи осеменительной пипетки в матку кобыле. Если смегма содержит возбудитель, то через три дня его можно выделить из цервикальной или маточной слизи. Одновременно до заражения и после заражения (7-14-е сутки) у кобылы исследуют сыворотку крови на наличие антител в РСК и РА.
Болезнь сопровождается синтезом гуморальных и секреторных антител. В основном используют методы, основанные на обнаружении гуморальных антител.
В РСК и пробирочной РА антитела удается выявить на 7-14-е сутки после заражения, и они достигают максимума к 15-20-е суткам (РСК 1:16 1:512; РА 1:80-1:640), затем их уровень довольно быстро снижается, особенно в РСК. Поэтому позитивные показания этих серологических реакций обычно совпадают с клиническими признаками болезни и могут помочь в уточнении этиологии воспаления гениталий. Лошадей-бактерионосителей при помощи РСК и РА, как правило, выявить не удается. В отдаленные сроки целесообразнее использовать более чувствительные серологические реакции (иммуноферментный метод, РНГА).
|
|
В России в соответствии с «Методическими указаниями по лабораторной диагностике контагиозного метрита лошадей» (1984) для серологической диагностики болезни рекомендована пробирочная РА. В качестве антигена применяют инактивированную формалином (0,25%) взвесь бактерий концентрацией 10 млрд.м.к. в 1 мл по оптическому стандарту мутности. РА ставят в объеме 1 мл, на 3%-ном растворе натрия хлорида (рН 7,2-7,4) в разведениях 1:20 и 1:40. Учет результатов проводят через 20-24 часа. Как положительный результат оценивают реакцию интенсивностью на три креста и более в разведении 1:40, сомнительный — на два креста в разведении 1:20 или на один-два креста в разведении 1:40.
При постановке РСК антиген готовят из 72-часовой культуры, выращенной на «шоколадном» агаре. Бактериальную массу смывают трис-буфером (рН 7,4), трижды отмывают центрифугированием, ресупендируют в буферном растворе и консервируют мертиолатом (1:10 000). Рабочее разведение антигена определяют в опыте титрации обычным способом. Реакцию ставят в объеме 1 мл. Исследуемую сыворотку крови инактивируют при 56° С в течение 30 минут. Эритроциты барана берут в концентрации 1%.
Первую фазу РСК проводят при 4-5° С в течение 17 часов. После добавления индикаторной системы компоненты выдерживают в водяной бане при 37° С в течение 1 часа.