Биопроба. При диагностике респираторного микоплазмоза биопробу проводят для выделения культуры возбудителя, а также для подтверждения патогенных свойств выделенной культуры микоплазм. Исследуемый материал вводят 7-9-дневным куриным эмбрионам в хориоаллантоисную полость в объеме 0,2 мл. Исследуют эмбрионы, погибшие через 48 часов и позднее после заражения. В положительных случаях обнаруживают отеки и кровоизлияния на коже головы, тела, лапках, застойные и дегенеративные изменения в паренхиматозных органах, отеки и кровоизлияния в околоплодных оболочках, аэросаккулиты, пневмонию. Обычно эмбрионы погибают на 5-7-е сутки. Однако часто требуется один или более пассажей, прежде чем наступают характерные изменения и гибель эмбрионов. При первичном заражении за положительный результат принимают гибель 50% и более зараженных эмбрионов при выживании контрольных.
Выделяемых от птиц
Признаки | Вид микоплазм | |||||||||||||
М. gallisepticum | М. synoviae | М. melagridis | М. iowae | М. anatis | М. lipofaciens | М. columborale | М. gallopovans | М. pulloram | М. columbinasale | М. columbiunum | М. gallinarum | М. iners | М. gallinaceum | |
Глюкоза | + | + | - | + | + | + | + | + | + | _ | _ | _ | _ | + |
Манноза | + | н.д. | - | н.д. | d | н.д. | _ | н.д. | н.д. | н.д. | _ | _ | _ | н.д. |
Аргинин (гидролиз) | - | - | + | + | _ | + | _ | _ | _ | + | + | + | + | _ |
Фосфатаза | - | - | + | _ | + | _ | _ | _ | _ | + | _ | _ | _ | _ |
Пленки, пятна | - | + | - | - | + | + | _ | _ | — | + | + | + | + | _ |
Тетразол (редукция) | + /+ | -/w | -/+ | + /+ | -/+ | -/+ | -/+ | d/d | -/- | -/- | -/+ | + /+ | -/- | -/- |
Гидролиз желатина | - | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | _ | н.д. | н.д. | н.д. | _ | _ | _ | н.д. |
Свертывание и разжижение сыворотки | - | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | - | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | - | - | н.д. |
Расщепление казеина | - | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | н.д. | - | н.д. | н.д. | н.д. | - | - | - | н.д. |
Гемадсорбирующие свойства | + | d | d | + | - | н.д. |
Примечание: аэробно/анаэробно; н.д. — нет данных; d — варьирукющий признак.
|
|
Гемагглютинирующими свойствами обладают М.gallisepticum, M. sinoviae, M. iowae и иногда некоторые штаммы М. melagridis.
Серологическую идентификацию М.gallisepticum, M. synoviae, М.melagridis обычно осуществляют при помощи кроличьих антисывороток в реакциях эпифлуоресценции, РДП, тесте ингибиции роста. Штаммы М. gallisepticum, M. sinoviae, M. melagridis и другие микоплазмы птиц имеют внутривидовые варианты антигенных свойств, что может быть выявлено путем электрофореза белков в полиакримидном геле.
При диагностике инфекции, вызванной возбудителем М.synoviae заражают бульонной культурой интраплантарно, интраартикулярно цыплят, индюшат и через 3-5 недель в РПГА или РДП регистрируют появление в крови антител к возбудителю, что позволяет типировать изолированную культуру. Заражение куриных эмбрионов вызывает их гибель на 4-14-е сутки.
|
|
Испытание патогенных свойств М. meleagridis показало штаммовую вариабельность вирулентных свойств возбудителя. При заражении культурой возбудителя куриных эмбрионов гибели не наблюдают. В результате заражения 7-14-дневных эмбрионов у 30-70% вылупившихся индюшат обнаруживают патологические изменения.
Штаммы М. iowae варьируют по вирулентным свойствам, некоторые штаммы вызывают гибель куриных и индюшиных эмбрионов при заражении в желточный мешок.
Серологические тесты применяют при диагностике болезней, обусловленных М. gallisepticum, M. sinoviae, M. melagridis. Серологические реакции, из-за низкого титра антител, практически не используют для диагностики М. iowae — инфекции.
Реакция агглютинации на стекле. Используют РА на стекле со свежей кровью или сывороткой крови. Используют окрашенные антигены
М. gallisepticum, M. sinoviae, M.melagridis. На предметном стекле смешивают 0,02 мл исследуемой сыворотки и 0,03 мл антигена, компоненты перемешивают в течение 2-3 минут и учитывают результат по общепринятой системе.Зараженная птица становится серопозитивной через 7-
10 дней после инфицирования. Чувствительность и специфичность реакции зависят от метода изготовления антигена.
Возможно наличие ложных положительных реакций после применения-гетерологичных эмульгированных вакцин. При оценке эпизоотической ситуации в хозяйствах обследуют приблизительно 5-10% поголовья. Положительная РА у 50% птиц и более указывает на наличие инфекции М. gallisepticum.
Для подтверждения результатов исследование разведенных сывороток крови. Агглютинация в титрах 1:8-1:10 и более оценивается как положительный результат. Результаты пластинчатой РА также подтверждают в реакции ингибиции гемаглютинации.
Реакция торможения гемагглютинации (РTГА). При помощи РТГА определяют зараженность родительского стада кур, наличие антител в сыворотке крови суточных цыплят, желтке яиц после удаления липидов. РТГА более специфична, но менее чувствительна, чем РА на стекле, причем при диагностике инфекции, вызываемой М. gallisepticum из-за внутривидовой антигенной гетерогенности антигены из разных штаммов могут не выявлять антитела к другим штаммам. Реакцию ставят, используя антиген в количестве четырех гемагглютинирующих единиц, титр 1:40-1:80 и более оценивают как положительный результат.
Иммуноферментный метод. Используют твердофазный ИФА для диагностики инфекций, вызываемых М. gallisepticum, M. sinoviae, M. melagridis, хотя, видимо из-за характеристик антигенов, регистрируются случаи ложных положительных реакций.