1. Определение коли-фага в фильтрате речной воды (демонстрация). На поверхность пластинчатого МПА «густым газоном» засевают культуру кишечной палочки. На посев наносят I – 2 капли исследуемого материала – фильтрата. Закрыв чашку Петри крышкой, оставляют посев на столе на 5 минут. Затем посев ставят на сутки в термостат. В положительном случае в месте нанесения фильтрата наблюдается «стерильное» пятно.
2. Определение титра коли-фага в жидкой питательной среде по Аппельману (демонстрация). Ряд пробирок содержит по 4,5 мл МПБ. В первую пробирку вносят 0,5 мл исследуемого фага, получая разведение 1:10, затем после перемешивания 0,5 мл материала переносят во вторую пробирку (разведение 1:100) и т.д. Из последней пробирки 0,5 мл содержимого удаляют. Затем во все пробирки вносят по I капле бульонной культуры кишечной палочки и пробирки помещают на 24 часа в термостат. Титр фага определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается лизис микробов (например 10-5).
3. Определение титра дизентерийного фага по Грациа (демонстрация). Готовят разведения исследуемого фага от 10-5 до 10-7. По 0,5 мл каждого разведения фага смешивают с 0,5 мл бульонной культуры дизентерийной палочки (Shigella sonnei). Смесь вносят в 3 мл расплавленного и охлажденного до 450 С 5% МПА, перемешивают и выливают на поверхность 3 чашек с МПА. Посевы инкубируют 24 часа в термостате при 370 С. Учитывают количество негативных колоний на единицу объема исходной суспензии фага. Титр фага определяется количеством фаговых частиц в I мл суспензии (табл. 5).
|
|
Таблица 5. Расчет титра фага по методу Грациа
Номер пробы | Число «стерильных пятен фага, полученных при посевах проб в разведениях | Число фаговых частиц | ||
10-5 | 10-6 | 10-7 | ||
1. | 7,3х107 | |||
2. | 1,0х108 | |||
3. | 7,7х106 |
4. Определение спектра литического действия дизентерийного фага (демонстрация). Чашку с МПА делят на 4 сектора. На каждый сектор петлей наносят каплю бульонной культуры Sh.sonnei, Sh.dysenteriae, Sh.flexneri, Sh.boydii соответственно и равномерно распределяют по поверхности агара. Затем на каждый сектор наносят по капле исследуемого фага. После инкубации в термостате в течение суток при 370 С выявляют сектора, где имеется лизис бактерий или «стерильные» пятна.
5. Фаготипирование культуры золотистого стафилококка (демонстрация). Бульонную культуру стафилококка в количестве 0,5 мл вносят в расплавленный и охлажденный до 450 С 0,7% МПА, перемешивают и распределяют по поверхности чашки с 2% МПА. Чашку делят на квадраты, в которые вносят по капле различных типовых стафилококковых фагов. После инкубации в термостате отмечают квадраты, в которых имеется лизис бактерий и по таблице определяют фаговар культуры.
|
|
6. Определение лизогении культуры возбудителя брюшного тифа (демонстрация). Исследуемую культуру, подвергнутую ультрафиолетовому облучению, засевают на МПБ, через сутки ее центрифугируют. Надосадочную жидкость, содержащую свободный фаг, переносят на посев индикаторной брюшнотифозной культуры в чашке Петри, инкубируют в термостате при 370 С в течение суток. Если исследуемая культура лизогенная, на посеве индикаторной брюшнотифозной культуры обнаруживают «стерильные» пятна.
7. Изучение биопрепаратов фага, применяемые для профилактики и лечения (стафилококковый бактериофаг, коли – фаг, сальмонеллезный бактериофаг, коли-протейный фаг, дизентерийный бактериофаг, протейный фаг, брюшнотифозный бактериофаг, стрептококковый фаг, паратифозный бактериофаг, холерный фаг Эль-Тор, холерный фаг классический)
8. Изучение препаратов фагов, применяемых для диагностики инфекционных болезней (индикаторные фаги - демонстрация).