Качественное определение флавоноидов

Цианидиновая проба. Взять три пробирки, в каждую помещают по 1мл исследуемого экстракта. В одну пробирку добавить несколько крупинок металлического магния, во вторую - цинка, в третьей оставить только экстракт. Затем во все три пробирки прибить по 5-7 капель концентрированной хлористоводородной кислоты.

При наличии значительного количества флавоноидов в пробирках с магнием и цинком сразу же появятся розовое, оранжевое или красное окрашивание. При малом количестве флавоноидов необходимо нагревание. Для этого пробирки поместить на водяную баню на 10 минут, а затем наблюдайте окраску.

Флавонолы. флаваноны и флавоны при восстановлении магнием или цинком в присутствии хлористоводородной кислоты дают розовое, красное или оранжевое окрашивание, обусловленное образованием антоцианидинов.

Третья пробирка контрольная: появление розового или красного окрашивания в ней указывает на присутствие в сырье антоциановых пигментов, халконов или ауронов, которые при добавлении только одной концентрированной хлористоводородной кислоты образуют красное окрашивание за счет образования оксониевых солей.

Реакция с минеральными кислотами. К I мл исследуемого экстракта прибавить 3-5 капель концентрированной хлористоводородной кислоты. При наличии в сырье флавонов и флавонолов появляется ярко-желтое окрашивание (соли оксония), при наличии флаванонов появляется окрашивание - от ярко-оранжевого до малинового цвета (соли халконов).

Реакция с циркония хлорокисью. К 1 мл исследуемого экстракта прибавить 3-5 капель 5% спиртового раствора циркония хлорокиси. При наличии флавоноидов, содержащих в положении 5 ОН-группу, появляется лимонно-желтое окрашивание.

Реакция с солями железа (III). К 1 мл исследуемого экстракта прибавить 2-3 капли 1% раствора железа (III) хлорида. При наличии в сырье 5-оксифлавонов образуются комплексы, окрашенные в зеленый цвет; халконы: флавонолы и флаванонолы образуют комплексы, окрашенные в коричневый цвет.

Реакция с раствором аммиака. К 1 мл исследуемого экстракта прибавить 3-5 капель концентрированного аммиака, нагреть. При наличии флавонов, флаванонов, флавонолов и флаванонолов появляется желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое или красное; при наличии антоцианов появляется синее или фиолетовое - окрашивание.

Реакция со свинца ацетатом. К 1 мл исследуемого экстракта прибавить 3-5 капель 2% основного свинца ацетата. При наличии флавонов, халконов, ауронов, содержащих свободную ортогидроксильную группу, в кольце В появляется ярко-желтое окрашивание.

Исследование флавоноидов методом хроматографии. 10 мл исследуемого экстракта упаривают на водяной бане до половины объема. На круглый диск хроматографической бумаги на расстоянии 0,5 см от центра нанести капилляром исследуемый экстракт, а в качестве свидетелей - спиртовые растворы рутина, кверцетина или других веществ. Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. В центр диска ввести фитиль из хроматографической бумаги. Хроматографирование проводят в чашках Петри, в качестве растворителя использовать 15% уксусную кислоту. Экспозиция 20-25 мин. Хроматограммы высушить до испарения растворителя и просмотреть в УФ-свете без предварительного проявления, а затем после проявления алюминия хлоридом и парами аммиака.

Количественное определение антоцианов
в цветках василька синего

Аналитическую пробу сырья измельчить до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 0,3 г (точная навеска) измельченного сырья поместить в колбу вместимостью 250 мл, прибавить 100 мл 1% раствора хлористоводородной кислоты, колбу присоединить к обратному холодильнику и нагреть на кипящей водяной бане в течение 15 мин. Извлечение отфильтровать - через вату в мерную колбу, прибавить 100 мл 1% раствора хлористоводородной кислоты, предварительно смыть частицы сырья с воронки в колбу и повторить экстрагирование указанным выше способом. Затем содержимое колбы отфильтровать через вату в ту же мерную колбу. Сырье на фильтре промывают 40 мл 1% раствора хлористоводородной кислоты. После охлаждения фильтрата довести объем извлечения до метки. Полученное извлечение отфильтровать через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 мл, отбросив первые 10 мл фильтрата, и измерить оптическую плотность фильтрата на спектрофотометре при длине волны 510 им в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют 1% раствор хлористоводородной кислоты.

Содержание суммы антоцианов в пересчете на цианидин-3,5-дигликозид в абсолютном сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где: D – оптическая плотность исследуемого раствора;

453 – удельный показатель поглощения цианидин-3,5-дигликозида в 1% растворе хлористоводородной кислоты;

m – масса сырья, г;

w – потеря в массе при высушивании сырья, %.

• Задача 122

• 4. Дайте характеристику лекарственному растительному сырью «Горца перечного трава». Приведите латинские названия сырья, производящего растения, семейства.

• Укажите химический состав. Объясните, с учетом физико-химических свойств, какими методами подтверждают наличие и определяют количество действующих веществ в сырье?

Herba Polygoni hydropiperis -трава горца перечного (водяного

перца)

(Polygoni hydropiperis herba — горца перечного (водяного перца) трава)

Собранная в фазу цветения и вы-1 сушенная трава дикорастущего однолетнего травянистого растения горца перечного (водяного перца) — Polygonum hydropiper L. из сем. гречишных; (Polygonaceae); используют в качестве лекарственного сырья и лекарственного средства.

Химический состав. В траве содержатся флавоноиды (2-2,5 %) — рутин, кверцитрин, гиперозид, кемпферол; метилированные флавонолы — изорамнетин и рамназин в виде сложных эфиров с калия бисульфатом. Кроме того, найдены дубильные вещества; эфирное масло; органические кислоты; витамин К1; кислота аскорбиновая, много микроэлементов.