- Перечислите методы определения мочевины в сыворотке крови и моче.
- Каков принцип метода определения мочевины в сыворотке крови и моче?
- Приведите формулу расчета определения мочевины в сыворотке крови и моче.
- Какова норма содержания мочевины в сыворотке крови и моче?
- Каково клинико-диагностическое значение определения мочевины в сыворотке крови и моче?
- Как изменяется содержание мочевины в крови при заболеваниях почек почему?
- Какой фермент участвует в превращении креатина в креатинин и где этот процесс локализован?
- Каков принцип метода определения креатинина в сыворотке крови и моче?
- Приведите формулу расчета определения креатинина в сыворотке крови и моче.
- Какова норма содержания креатинина в сыворотке крови и моче?
- Каково клинико-диагностическое значение определения креатинина в сыворотке крови и моче?
- Дайте объяснение понятию клиренс.
- Что лежит в основе постановки пробы Реберга?
- С какой целью в клинике ставят пробу Реберга?
- Приведите формулы расчета при постановке пробы?
- Какова норма фильтрации и реабсорбции почек при постановке пробы Реберга?
- В чем заключается принцип определения мочевой кислоты в сыворотке крови и моче?
- Какое количество мочевой кислоты выделяется в норме с мочой в сутки?
- С какой целью определяют в клинике мочевую кислоту в крови и моче?
- Какова норма содержания мочевой кислоты в сыворотке крови и моче?
IV ИССЛЕДОВАНИЕ ПИГМЕНТНОГО ОБМЕНА
Наиболее хорошо известный пигмент крови — гемоглобин. Это сложный белок, хромопротеин, который состоит из белковой части, глобина, и простетической группы, представленной четырьмя гемами. Структура каждого гема хорошо изучена.
Известно, что средний срок жизни эритроцитов составляет 100—110 сут. По окончании этого периода происходит их разрушение. Деструкции подергается и содержащийся в эритроцитах гемоглобин. Процесс распада начинается уже в сосудистом русле, а завершается в клеточных элементах системы фагоцитирующих мононуклеаров (купферовских клетках печени, гистиоцитах соединительной ткани, плазматических клетках костного мозга). После выхода гемоглобина из структуры эритроцитов так называемый внеэритроцитарный гемоглобин связывается с гаптоглобином плазмы, образуя комплекс «гемоглобин—гаптоглобин». Благодаря этому гемоглобин задерживается в сосудистом русле, не проходя через почечный фильтр. Вследствие трипсиноподобного действия бета-цепи гаптоглобина и вызванных его влиянием конформационных изменений в порфириновом кольце тема создаются условия для более легкого разрушения гемоглобина в клеточных элементах системы фагоцитирующих мононуклеаров (печени, селезенки, костного мозга и других органов). Вначале происходит разрыв метинового мостика между I и II пиррольными ядрами порфиринового кольца с одновременным окислением двухвалентного железа в трехвалентное. Образующийся таким образом высокомолекулярный пигмент зеленого цвета вердоглобин (синонимы: вердогемоглобин, холеглобин, псевдогемоглобин) представляет собой комплекс, состоящий из глобина, разорванной системы порфиринового кольца и трехвалентного железа. Дальнейшие превращения приводят к потере вердоглобином железа и глобина, в результате чего порфириновое кольцо разворачивается в цепь и формируется низкомолекулярный желчный пигмент зеленого цвета — биливердин. Почти весь он ферментативным путем восстанавливается в важнейший красно-желтый пигмент желчи — билирубин, являющийся обычным компонентом плазмы крови. При распаде 1 г гемоглобина образуется 34 мг билирубина. Будучи водонерастворимым, свободный билирубин соединяется с альбумином плазмы, который служит основным его транспортером в плазме крови. Комплекс «альбумин—билирубин», доставленный с током крови в печень, на поверхности плазматической мембраны гепатоцита подвергается диссоциации.
В настоящее время под свободным билирубином принято понимать неконъюгированный (с глюкуроновой кислотой) билирубин, который из-за плохой растворимости в воде дает трудную, непрямую (происходящую лишь после внесения в пробу этилового спирта или другого ускорителя, «акселератора») реакцию с диазореактивом Ван ден Берга. Поэтому его раньше именовали «непрямой» билирубин. Билирубинглюкурониды (или связанный, коньюгированный билирубин) в отличие от свободного билирубина тотчас вступают в реакцию с диазореактивом («прямой» билирубин). Следует иметь в виду, что в самой плазме крови билирубин, не конъюгированный с глюкуроновой кислотой, может быть либо связан с альбумином, либо нет. Последняя фракция (не связанного ни с альбумином, ни с липидами, ни с другими компонентами крови билирубина) наиболее токсична. При внутривенном введении ее в организм животного наступает некроз печени, сопровождающийся выходом ферментов в кровь; происходят гемолиз эритроцитов, разобщение окисления и фосфорилирования.
Эта фракция при ее повышении проявляется поражением центральной нервной системы, возникновением очагов некроза в паренхиматозных органах, подавлением клеточного иммунитета, развитием анемии вследствие гемолиза эритроцитов.
Для определения содержания билирубина в сыворотке (плазме) крови используют в основном химические и физико-химические методы исследования, среди которых выделяют колориметрические, спектрофотометрические (ручные и автоматизированные), хроматографические, флюориметрические и некоторые другие.
Большинство из них базируется на описанной еще Эрлихом в 1884 г. реакции билирубина (мочи) с диазофенилсульфоновой кислотой.
В клинико-лабораторной практике наиболее широко используется способ определения общего («полного»), свободного («непрямого») и связанного («прямого») билирубина является метод Йендрашика – Клеггорна-Грофа, который был выбран в качестве унифицированного.
Пробы должны анализироваться в течение 2 ч с момента взятия крови ли они хранятся при комнатной температуре и в темноте, или в течение 12ч при хранении в условиях охлаждения при температуре 2—8°С в темноте.
Гемолиз сыворотки снижает количество определяемого билирубина пропорционально присутствию в пробе гемоглобина. Следовательно, сыворотка крови не должна быть гемолизирована: это приводит к ошибочному занижению результатов. Напротив, выраженная липемия обусловливает завышение результатов, если не делается измерение относительно «бланка» пробы.
Концентрация общего билирубина в плазме крови новорожденных составляет: 22,2—70,1 мкмоль/л (1—2-е сут), 22,2—196,6 мкмоль/л (З-и-4-е сут), 22,2-208,9 мкмоль/л (5-6-е сут), 22,2-167,6 мкмоль/л (7-10-е сут)| 17,1—85,5 мкмоль/л (до 1 мес); в плазме крови взрослых — 17±4,25 мкмоль/л.