2015-04-30
1072
(по Раппопорту – Эйхгорну)
Принцип метода. На безбелковый фильтрат (центрифугат) сыворотки крови воздействуют щелочным раствором гипобромита, остаток которого устанавливают йодометрически. Содержание остаточного азота прямо пропорционально количеству разрушенного гипобромита.
Реактивы
1. Осаждающий раствор. В мерную колбу ёмкостью 1000 мл вливают 44,8 мл раствора вольфрамовокислого натрия в концентрации 100 г/л; добавляют 2 г лимоннокислого натрия и 6,4 г сернокислого натрия. Все ингредиенты растворяют приблизительно в 800 мл дистиллированной воды. Затем прибавляют 44,8 мл 1н раствора серной кислоты и 2 г сернокислого кадмия; после чего доводят объём дистиллированной водой до 1л.
2. Дезаминирующий гипобромитный раствор. Получают путем смеши-вания реактивов А и В. Реактив А готовят из трех отдельных реактивов (А1, А2 и А3).
Реактив А1: 42,25 г борной кислоты и 12,8 г NаОН вносят в 250 мл дистиллированной воды, смесь тщательно встряхивают, кипятят в течение 30 мин и после охлаждения доводят дистиллированной водой до 500 мл.
|
|
|
Реактив А2: насыщенный (50 г/л) раствор фторида натрия. Получают путем растворения 5 г фторида натрия в 100 мл горячей дистиллированной воды с последующим фильтрованием через бумажный фильтр.
Реактив А3: раствор NаОН, 27 г/л.
Реактив А: 250 мл реактива А1 смешивают с 150 мл реактива А2 и с 50 мл реактива А3 в соотношении 5:3:1.
Реактив В: в мерной колбе ёмкостью 100 мл, содержащей 50 мл дистиллированной воды, растворяют 2 г бромида калия и прибавляют 0,25 мл чистого брома???. Смесь взбалтывают до полного растворения всех компонентов и доводят объём дистиллированной водой до метки.
3. 0,005н раствор гипосульфита натрия. 5 мл 0,1н гипосульфита натрия доводят свежепрокипячённой и охлажденной без доступа углекислого газа воздух???а дистиллированной водой до 100 мл (в мерной колбе). Исходный раствор (0,1 н) готовят из фиксанала.
4. Раствор йодида калия, 100 г/л.
5. Раствор крахмала, 2,5 г/л.
6. Раствор соляной кислоты, 180 г/л.
Ход определения. В центрифужную пробирку вносят 1 мл дистиллированной воды, 0,1 мл сыворотки и 4 мл осадителя (реактив 1). Смешивают и через 10-15 мин центрифугируют на протяжении 5-10 мин.
За это время готовят рабочий раствор гипобромита. В небольшой стаканчик отбирают 4 мл центрифугата, добавляют 5 мл рабочего раствора гипобро-мита, содержимое взбалтывают и оставляют стоять 1-2 мин. Затем вносят 0,2 мл раствора йодида калия, 3 мл раствора HCl, смесь взбалтывают и титруют 0,005 н раствором гипосульфита натрия до слабо-жёлтого цвета. Добавляют 2-3 капли раствора крахмала и дотитровывают смесь до полного обесцвечивания. Одновременно с опытной ставят контрольную пробу, содержащую 4 мл раствора осадителя, 5 мл – гипобромита, 0,2 мл – KI, 3 мл - HCl. Контрольную пробу также титруют до обесцвечивания.
Разность в количестве мл гипосульфита, пошедшего на титрование контрольных (К) и опытных (О) проб, умножают на коэффициент (0,3) и выражают ответ в размерности г/л:
(К – О) · 0,3.
Содержание остаточного азота в сыворотке крови практически здоровых
взрослых людей составляет 0,20-0,40 г/л (14-28 ммоль/л).
