Подсчет количества микроорганизмов в почве

Количество микроорганизмов определяют подсчетом развившихся колоний в чашках Петри. Берут среднее арифметическое (3 чашки) с учетом разведения. Подсчет производится без снятия крышки с чашки Петри. При большом количестве колоний на чашку Петри накладывают кружок фильтровальной бумаги с вырезанным радиально сектором и, передвигая его на крышке, делая соответственные пометки на стекле, производят подсчет колоний. Чем больше колоний, тем меньше площадь сектора.

Например: колоний в чашках Петри №1, 2 и 3 соответственно 80, 120 и 100. Следовательно, количество аэробных микроорганизмов в 1 г. исследуемой почвы:

Описание колоний и микроскопия

Вследствие микроскопической величины и простоты внешней формы определение бактерий производится не по одному, а по многим морфологическим признакам, а также культуральным и физиологическим. Описанию этих признаков бактерий придается важное значение в микробиологии.

Культуральными называют такие признаки, которые бактерии проявляют при выращивании их на чистых культурах на различных питательных средах. К ним относится: характер pocтa, тип колоний, способность к разжижению желатина и т.д.

Для ознакомления с методикой студентам рекомендуется описать 2-3 колонии бактерий по следующим культурным признакам: форма колонии, цвет, блеск, края колонии, центр, поверхность колонии. Практически поступают так: в чашках Петри с посевом выбирают различные колонии (по цвету, форме, консистенции) отмечают их цветным восковым карандашом снизу и описывают в форме текста диагноза бактерий.

Затем переходят к описанию морфологических признаков, из которых обычно отмечается форма бактериальной клетки, способность к движению, характер жгутования, способность к спорообразованию, окраска по Грамму. Для этого берут немного бактериальной массы из ранее описанной колонии, проводя петлей от края колонии к центру, на предметном стекле в капле воды готовят временный прижизненный препарат для микроскопирования. Имеете с учетом бактерий можно произвести и учет почвенных грибов - дрожжевых и плесневых. Для посева грибов можно использовать сусло-агар. Сусло-агар приготавливают заранее, следующим образом: к свежему заводскому суслу разведенному водой в 2,5 раза добавляют 2 % агара. подкисляют лимонной кислотой до слабокислой реакции по лакмусу, разливают в пробирки и стерилизуют в автоклаве. Посев грибов можно производить параллельно с посевом бактерий при разведении почвы 1 г. в 1000 или 10000 раз той же пипеткой, которой переносят почвенную болтушку из пробирки №1 в пробирку № 2 (1: 1000) или же из пробирки № 2 в пробирку № 3, но только после того как будет сделано соответствующее разведение. Посев производится в 3 чашки Петри, так же как идля бактерий. Инкубацию посева следует вести при температуре 22 - 25 ⁰С в течении 5 суток. Подсчет колоний и определение количества грибов в 1 г почвы проводят так же, как и при учете бактерий. При описания посева желательно определять, кроме семейства еще и род грибов.

Вопросы для закрепления:

1. Что такое индекс Coli? Как его рассчитать по данным титрам?

2. Какие показатели определяют при исследовании воздуха?

3. Какова микрофлора воздуха? От каких факторов зависит число микроорганизмов в воздухе и их качественный состав?

4. Является ли воздух субстрактом пригодным для жизни микробов? Почему?

5. Назовите наиболее типичных представителей микрофлоры почвы?

6. Как производят подсчет количества микроорганизмов в воздухе (по Коху)?

7. Какие характерные колонии высеиваются в почвенной болтушке?

8. Как производят санитарно-бактериологические исследования почвы, воздуха, воды?

Домашнее задание: подготовиться к защите лабораторной работы