Ход работы

Cвойства дисахаридов и полисахаридов

Задание 1. Отсутствие редуцирующих свойств у сахарозы.

Сахароза не обладает редуцирующими свойствами. Для того, чтобы убедиться в этом, с раствором сахарозыпроводят реакцию с Фелинговой жидкостью 1 (CuSO₄*5Н₂O) и 2 (С₄Н₄O₆ KNa*4Н₂О на NаОН).

Задание 2. Гидролиз сахарозы.

При гидролизе сахарозы образуются моносахара (глюкоза и фруктоза). Для проведения гидролиза в пробирку наливают 2 мл раствора сахарозы и 2 мл раствора 2н НС1. Содержимое пробирки нагревают до кипения. После охлаждения пробы проводят реакцию с продуктами гидролиза сахарозы для определения восстанавливающих свойств. Для этого в пробирку, в которой проводился гидролиз, прибавляют по 2 мл растворов Фелинга-1 и Фелинга-2. Пробирки нагревают до кипения. При этом выпадает осадок закиси меди красного цвета.

Реакция протекает следующим образом:

Задание 3. Качественные реакции на крахмал:а)

а) Реакция с йодом. При реакции крахмала с йодом развивается синее окрашивание. Для проведения реакции к 2 мл раствора крахмала приливают 2-3 капли раствора 1₂ в КI.

б) Крахмал не обладает восстанавливающими свойствами. К 2 мл раствора крахмала приливают 1 мл раствора Фелинга-1 и 1 мл раствора Фелинга-2. Пробу нагревают. Красный осадок закиси меди не выпадает.

Задание 4. Обнаружение пентоз.

В пробирку вносят небольшое количество опилок и приливают к ним 1 мл НС1 (1:1). Пробирку нагревают (при этом освобождается пентоза). Соляная кислота отнимает от пентоз 3 части воды. Образуется циклическое соединение фурфурол, выделяющееся из пробирки в виде белых паров. Реакция протекает следующим образом:

Для обнаружения фурфурола к пробирке подносят полоску фильтровальной бумаги, смоченной раствором Толленса (С₆Н₅Н)Н₂ в СН₃СООН (1:1). Фурфурол с анилином дает красное окрашивание.

Задание 5.. 0пределение ферментативной активности фосфоглюкомутазы:

Фосфоглюкомутаза является ферментом гликогенолигического превращения углеводов и катализирует реакцию переноса остатка фосфорной кислоты фосфорилированной глюкозы из положения 1 в положение 6.

Глюкозо-1-фосфат ↔ Глюкозо_:б-фосфат

Фосфоглюкомутаза

Принцип метода.

Мерой активности фермента служит убыль глюкозо-1-фосфата в испытуемой пробе. Поскольку в процессе ферментативного катализа происходит превращение легкогидролизуемого соединения (глюкозо-1-фосфат) в трудно-гидролизуемое (глюкозо-6-фосфат), можно высчитать убыль глюкозо-1-фосфат по разнице содержания неорганического фосфата в опытной и контрольной пробах. Определение проводят после кипячения проб в 1н серной кислоте в течение 10 минут.

Проведение ферментативной реакции.

Схема заполнения проб:

Пробы перемешивают.

Пробы перемешивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре

Пробы фильтруют через бумажный фильтр. Затем к фильтрату добавляют по 2 мл 2н Н₂S0₄ и пробы кипятят в водяной бане в течение 10 минут. После охлаждения проб определяют содержание в них неорганического фосфата

Определение неорганического фосфата по методу Фиске-Суббароу.

Неорганический фосфат при взаимодействии с молибденовокислым аммонием образует фосфорномолибденовокислый аммоний, который в присутствии восстановителя превращается в смесь окислов молибдена, окрашенных в синий цвет.

Рабочие растворы: 2,5% раствор молибдата аммония на 1н Н₂S0₄, 0,08% раствор эйконогена, содержащий NаНSОз и Nа2SОз.

Схема заполнения проб:

Пробы перемешивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре.Затем фотометрируют при 660 нм. По разности в количестве фосфата в опытной и контрольной пробах рассчитывают количество глюкозо-1-фосфат, превращенного в глюкозо-6-фосфат.