Обнаружение бактерий рожи свиней, листериоза и пастереллеза
Эти микроорганизмы выявляют по специфическому росту на мясопептонном шаре и дифференцируют по морфологическим, культуральным и биологическим свойствам.
На мясопептонном агаре они растут в виде мелких прозрачных колоний. Из этих колоний готовят мазки с окраской по Граму, исследуют на подвижность и проводят посев на МПА и МПБ.
При необходимости проводят дополнительную дифференциацию листерий от возбудителя рожи свиней с применением желатина. Листерии на нем, не разжижая, дают медленный рост в виде узловатой нити с неровными краями и пушистыми отростками; они ферментируют салицин; вызывают гемолиз на агаре с кровью, на мясопептонном печеночной агаре с добавлением 0,5% глюкозы, 3% глицерина, 0,01°о теллурита калия растут в виде мелких черных колоний. При биопробе на морских свинках вызывают кератокон ью1 исгивит.
Для проведения пробы на каталазу к суточной культуре добавляют 1 мл 10%-ного раствора перекиси водорода. Л истерии, выделяя каталазу, расщепляет перекись водорода с образованием пузырьков газа.
|
|
Б результате бактериологического исследования мяса и мясопродуктов часто выявляются бактерии, вызывающие пищевые токсикоинфекции. К ним относятся бактерии семейства Enterabacteriaceae, родов: Escherichia, Salmonella, Proteus. Наиболее опасен из них род Salmonella. Бактерии различных видов этого рода по морфологическим и культуральным свойствам друг от друга не отличаются. Они имеют общие признаки с бактериями рода Escherichia а рода Proteus.
Выявление сальмонелл проводят в четыре последовательных этапа: микроскопия и первичный посев, обогащение, посев со среды обогащения и подтверждение.
На первом этапе проводят микроскопию мазков с окраской по Грану, делают посев на плотные элективные среды. Посевы 18-24 часа выдерживают в термостате (37°С) и определяют наличие типичных колоний. На среде Эндо - это Круглые, бесцветные или слегка розоватые, прозрачные (полупрозрачные) мелкие колонии, на среде Левина - прозрачные, бледные, нежно-розовые или розовато-фиолетовые колонии.
На втором этапе (обогащение) С целью накопления сальмонелл проводят посев на жидкие селективные среды (среды Мюллера, Киллиана, Кауфмана, селенитовый Ф-бульон, хлористомапшевая среда). Их выдерживают в термостате при температуре 37°С (на селенитовом Ф-бульоне при+43'С).
На третьем этапе, после обогащения, проводят пересев с жидких сред на плотные селективные диагностические среды, которые после термостатной выдержки (37°С) исследуют на присутствие типичных колоний.
На четвертом этапе проводят подтверждение наличия бактерий из рода сальмонелл путем определения морфологических, биохимических и серологических свойств.
|
|
При наличии роста микроорганизмов на питательных средах исследуют 3-5 подозрительных колоний с каждой чашки в следующем порядке:.из части колоний готовят мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют. Одновременно исследуют на подвижность в «висячей капле». Оставшуюся часть колонии растирают в конденсационной воде скошенного агара или в 1-2 каплях добавленного к агару стерильного бульона для биохимической и серологической типизации.
По серологической типизации систематизированы около 2000 серотипов сальмонелл. Они встречаются (обитают) в кишечнике животных и человека и во внешней среде. Морфологически эта палочка с закругленными концами, иногда овальной формы, длина их 2-4 и ширина - 0,5 ммк. Все они (кроме S. pullorum u S. gallinarum) хорошо подвижны, по Граму - отрицательны, спор и капсул не образуют, являются аэробами или факультативными анаэробами. Оптимальная среда для роста слабощелочная (рН- 7,2-7,5), оптимальная температура роста-37"С (не исключается их рост при низких плюсовых температурах 5-8°С). По росту на простом агаре и обычных жидких питательных средах сальмонеллы почти неразличимы на мясопептонном агаре гладкие формы, S-формы этих бактерии образуют круглые, полупрозрачные, выпуклые, иногда со слегка вдавленным центром влажные колонии с легким металлическим блеском. Шероховатые (R-формы) растут в виде неровно округленных, шероховатых, тусклых и сухих колоний. На скошенном агаре растут пышно, образуя в конденсационной воде сильную муть, на М11Б они вызывают равномерное помутнение среды, желатину не разжижают, индол не образуют, молоко не ферментируют.
На плотных селективных средах сальмонеллы растут в виде характерных колоний: на бактоагаре Плоскирева - бесцветные мелкие колонии; на висмут-сульфитном агаре - черные или коричневые колонии с характерным металлическим блеском с прокрашиванием в черный цвет участка среды под колонией. Лишь некоторые серологические типы сальмонелл из группы С растут на висмут-сульфитном агаре в виде нежных светло-зеленых и крупных колоний.
Несмотря на общность морфологических и культуральных характеристик, а также токсинообразоания, бактерии рода сальмонелла отличаются друг от друга по биохимическим и антигенным (серологическим) свойствам. Эти различия положены и основу научно разработанных методов типизации.
Существуют два основных метода типизации (т. е. установления видов) бактерий рода сальмонелла: серологический и биохимический. Для серологической типизации используют реакцию агглютинации с салъмонеллезными сыворотками.
За немногими исключениями сальмонеллы имеют два ряда антигенов: термостабпльный О-антиген (соматический, связанный с телом бактерий) и термолабильный Н-антиген (жгутиковый, связанный с двигательным аппаратом бактерий). Каждый из этих антигенов состоит из двух и более компонентов или фракций (рецепторов).
По различию в строении О- и Н-антигенов у отдельных видов сальмонелл Кауфман и Уайт систематизировали бактерии этого рода на несколько серологических групп - А, В, С, Д, Е и т. д. Основой для подобной систематики группы является общность их соматического антигена. Каждый вид бактерий, входящих в определенную серологическую группу, будет агглютинироваться с сывороткой, приготовленной путем иммунизации животного культурой любой бактерии, входящей в данную группу. Такие сыворотки называют групповыми, а реакцию агглютинашш с ними - групповой.
Кроме групповых наши биофабрики готовят специфические мопорецепторные сыворотки. Они агглютинируют только определенный вид сальмонелл.
Однако для практики ветсанэкспертизы, при определении ветеринарно-санитарной оценки мяса и мясопродуктов, видовая диагностика сальмонелл значения не имеет. Она необходима для эпидемиологов, эпизоотологов, гигиенистов для лечения людей или животных, больных сальмонеллезом.
|
|
Для ветсанэкспертизы необходимо определить род сальмонелл, так как санитарная оценка при сальмонеллезе одинаковая и не зависит от видовой принадлежности возбудителя. Поэтому r практике ветсанэкспертизы пользуются в основном групповыми агглютинирующими сыворотками.
Для биохимической типизации сальмонелл применяют различные элективные среды: Эндо, Смирнова, Падлевского, Левина, Плоскирева и др. Более употребляемая из них среда Эндо. Ингредиентом ее является сахар-лактоза, а индикатором - фуксин, обесцвеченный сернистокислым натрием. Бактерии кишечной группы разлагают лактозу, а сальмонеллезные бактерии - не разлагают. При росте бактерий рода Е. coli на среде Эндо вследствие разложения лактозы и образования молочной кислоты восстанавливается красный цвет фуксина, чего не происходит при росте сальмонелл. В связи с этим колонии бактерий кишечной группы на среде Эндо будут красно-фиолетовыми с металлическим блеском, и среда вокруг колоний окрасится в красный цвет; сальмонеллы растут на этой среде в виде полупрозрачных колонии светло-розового цвета с голубоватым оттенком.
Для дальнейшей биохимической типизации сальмонелл применяют малый или большой пестрый ряд сред. В состав большого пестрого ряда входят: среды Гисса с различными сахарами и многоатомными спиртами, а также бульон с глицерином (по Штерну), среда с рамнозой (лакмусовое молоко и МПБ).
Бактериологическая диагностика сальмонеллеза основывается на обнаружении подвижных (кроме S. pullorum, S. gallinarum), грамотрицателъных палочек, не ферментирующих лактозу и сахарозу, по ферментирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа (S. typhinmurium маннит не ферментирует), а также характерном росте па элективных средах, дающих положительную реакцию агглютинации с О- и Н-сальмонеллезпыми сыворотками).