Количественный анализ
Условия проведения хроматографического анализа
При проведении хроматографического анализа необходимо выбрать оптимальные условия разделения анализируемых компонентов. Как правило, при их определении руководствуются литературными данными. На их основании экспериментально выбирают:
§ неподвижную фазу в газожидкостной или адсорбент в газоадсорбционной хроматографии;
§ твёрдый инертный носитель в газожидкостной хроматографии;
§ газ-носитель;
§ расход газа-носителя;
§ объём пробы;
§ температуру колонки.
Качественный анализ
Основные способы идентификации веществ:
1. Метод метки
Первый вариант метода основан на том, что в одинаковых условиях экспериментально определяют времена удерживания эталонных (метка) и анализируемых веществ и сравнивают их. Равенство параметров удержания позволяет идентифицировать вещество.
Второй вариант метода метки заключается в том, что в анализируемую смесь вводят эталонный компонент (метка), присутствие которого в смеси предполагается. Увеличение высоты соответствующего пика по сравнению с высотой пика до введения добавки свидетельствует о наличии этого соединения в смеси.
2. Использование литературных значений параметров удерживания.
В основе количественного анализа лежит зависимость площади пика от количества вещества (в некоторых случаях используют высоту пика).
Существуют различные способы определения площади пиков:
§ по формуле, как площадь треугольника;
§ при помощи планиметра;
§ взвешиванием вырезанных пиков (пики на хроматограмме копируют на однородную бумагу, вырезают и взвешивают);
§ при помощи электронного интегратора;
§ при помощи ЭВМ.
Точность количественного хроматографического анализа в значительной степени определяется выбором наиболее рационального метода расчёта концентрации веществ. Основными методами являются:
§ метод абсолютной калибровки,
§ метод внутренней нормализации,
§ метод внутреннего стандарта.
Сущность метода заключается в том, что в хроматографическую колонку вводят известные количества стандартного вещества и определяют площади пиков. По полученным данным строят калибровочный график. Затем хроматографируют анализируемую смесь и по графику определяют содержание данного компонента.
Если график линеен, то можно также рассчитать результаты анализа с использованием абсолютных калибровочных коэффициентов. Для расчёта этих коэффициентов определяют площади пиков не менее 10 стандартных смесей с различным содержанием данного вещества i. Затем используют формулу.
ki = ω i q / (S ∙ 100),
где ki – абсолютный поправочный коэффициент i -го вещества; ω i – содержание i -го компонента в стандартной смеси (%); S – площадь пика;
q – величина пробы (объём, см3 – для газов, мкл – для жидкостей, или масса, мкг – для жидкостей и твёрдых веществ).
Полученные таким образом коэффициенты усредняют. Затем проводят анализ исследуемой смеси и рассчитывают результат по формуле
ω i = ki ∙ S ∙ 100/ q.
Метод абсолютной градуировки довольно прост, но необходимыми условиями применения его являются точность и воспроизводимость дозирования пробы, строгое соблюдение постоянства параметров режима хроматографирования при градуировке прибора и при определении содержания хроматографируемого вещества.
Метод абсолютной градуировки особенно широко применяют при определении одного или нескольких компонентов смеси, в частности при использовании хроматографа для регулирования режима технологического процесса по содержанию в продуктах одного или небольшого числа веществ. Этот метод является основным при определении микропримесей.