Окраска микроорганизмов по Граму

Метод предложен датским ученым Грамом в 1884 г. Способность бактерий окрашиваться (или не окрашиваться) по методу Грама является важным таксономическим свойством, по которому все бактерии делят на 2 группы:

- грамположительные Гр (+),

- грамотрицательные Гр (-).

К грамположительным относят бактерии, в клетках которых комплекс генцианового фиолетового (генцианвиолета) с йодом удерживается при обработке спиртом. Бактерии, не обладающие свойством удерживать данный комплекс и обесцвечивающиеся при обработке спиртом, относят к грамотрицательным. После окрашивания грамположительные бактерии окрашиваются в фиолетовый цвет, а грамотрицательные - в красный цвет. Различие между этими бактериями заключается в наличии особых веществ в клеточной оболочке микроорганизмов.

Результаты окраски по Граму зависят от возраста культуры: старые и мертвые клетки всегда окрашиваются Гр (-). Хорошим объектом для окраски по Граму служат дрожжи (грамположительны) и кишечная палочка (грамотрицательная).

Фиксированными считают клетки микроорганизмов, в которых прерваны жизненные процессы, но полностью сохранена тонкая структура. Фиксированные окрашенные препараты используют для выявления ряда морфологических особенностей, количественного учета микроорганизмов, а также для проверки чистоты культуры. Их приготовление состоит из этапов:

- приготовление мазка;

- высушивание мазка;

- фиксация мазка;

- окраска мазка.

Окраску по Граму производят на фиксированных препаратах микроорганизмов.

Задание № 1: Опишите культуральные признаки предложенной вам колонии.

Задание № 2: Приготовьте мазок из описанной вами колонии микроорганизмов. Окрасьте его по Граму.

Задание № 3: Зарисуйте увиденные формы микроорганизмов.

ХОД РАБОТЫ

Оборудование и материалы: культура микроорганизмов, покровные и предметные стекла, спиртовка, бактериологическая петля, бактериологическая игла, фуксин Пфейфера, генцианвиолет, спирт, раствор Люголя, фильтровальная бумага, кристаллизатор с матрасиком.