2015-06-10
1358ВНЕКЛЕТОЧНОЕ ПРОСТРАНСТВО, ОКСИТОЦИН,
Студент А.В Чеботарева
Руководитель М.Ю.Мещерякова
ОГЛАВЛЕНИЕ
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ 4
ВВЕДЕНИЕ 5
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Водные пространства организма
1.2. Физиология водно-солевого обмена
1.3. Осмоляльность плазмы крови
1.4. Гормоны нейрогипофиза
1.5. Основные физиологические эффекты окситоцина
1.6. Неклассические эффекты окситоцина
Глава 2. Результаты исследования
2.1. Цель и задачи исследования
2.2. Объект и методы исследования
2.3. Полученные результаты и их обсуждение
ВЫВОДЫ СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ
ОВ – Общая вода
АП – Антипирин
ВВЕДЕНИЕ
Название “окситоцин” произошло от греческого словосочетания “быстрое рождение” [22]. В первую очередь известно, что пептид выполняет
функции, связанные с родами и лактацией [1]. У женщин окситоцин стимулирует сокращение миометрия матки во время родов и выделение молока при лактации, действуя на миоэпителиальные клетки грудных желез. В основе сокращения миоэпителиальных элементов молочной железы лежит фосфорилирование миозина этих клеток в ответ на действие пептида. Регулярная продукция окситоцина молочной железой стимулирует сокращение миоэпителиальных клеток, уменьшая перегрузку и растяжение железы и помогая активному выведению из нее канцерогенных веществ. Таким образом, продукция окситоцина, возможно, является фактором профилактики при развитии рака груди и постклимактерический период [23]. Концентрации окситоцина в плазме крови мужчин, небеременных женщин и беременных передродами практически не различаются [24]. Одинаковые концентрации окситоцина были обнаружены в мужском и женском гипофизах, и оказалось, что одни и те же стимулы вызывают выброс окситоцина у обоих полов, но влияют на разные физиологические процессы [22]. Кормление грудью – один из факторов секреции окситоцина. Во время кормления грудью у женщин наблюдается повышение уровня окситоцина в плазме крови. Аналогичная реакция организма наблюдается и при родах.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Водные пространства организма
Вода в организме находится в трех состояниях:
1.Конституционная (не свободная)
2. Гидратационная (полусвободная)
3.Лабиальная (свободная) – вода, свободно перемещающаяся в организме.
При катаболизме молекул, содержащих воду, в сутки образуется приблизительно 0,2-0,3 литров чистой воды (без солей). При максимальном катаболизме может образовываться до 9 литров. Из 100 грамм жира образуется 107,1 мл воды. Из 100 грамм белка -41,3 мл. Из 109 грамм углеводов- 55,5 мл. Из 100 грамм спирта – 102,4 мл [9].
В организме человека вода занимает у мужчин ~60 % от массы тела, у женщин ~60-50 % и у стариков приблизительно~50-40 %. Из этих 60 % в клетке находится 40 %, а во внеклеточном пространстве 20 %. Из 20 % внеклеточного пространство 15 % приходится на межклеточное пространство, а 5 % - на воду в сосудах (плазмы крови и лимфы). Всего кровь и лимфа занимают 8 % от массы тела = 5 % и 3 % форменных элементов [9].
Также отдельно выделяют трансцеллюлярное пространство (еще 2,4 % от массы тела) – жидкость, в норме находящиеся в полостях организма – спинномозговая, плевральная, перикардиальная, внутриглазная, брюшная, жидкость внутри ЖКТ и моча. Эта жидкость постоянно секретируется и всасывается, осуществляя транспортную и амортизирующую функции (полости, не открывающиеся во внешнюю среду), транспортную, пищеварительную и выделительную функции (полости, открывающиеся во внешнюю среду).
За сутки в ЖКТ секретируется и всасывается около 7-9 литров воды. При патологических состояниях в трансцеллюлярном пространстве могут накапливаться большие объемы жидкости, не участвующие в обмене веществ. Внеклеточная жидкость полностью обновляется за 9 – 15 суток.
Общий объем жидкостей организма, составляющий у млекопитающих примерно 60% массы тела, распределен между двумя большими секторами: внутриклеточным (40% массы тела) и внеклеточным (20% массы тела). Внеклеточный сектор включает объем жидкости, находящиеся в интерстициальном (межклеточном) пространстве, и жидкости, циркулирующей в сосудистом русле. Небольшой объем составляет и так называемая трансцеллюлярная жидкость, находящейся в региональных полостях (цереброспинальная, внутриглазная, плевральная и т.д.). Внеклеточная и внутриклеточная жидкость значительно отличается по составу и концентрации отдельных компонентов, но общая суммарная концентрация осмотически активных веществ, примерно одинакова. Перемещение воды из одного сектора в другой происходит уже при небольших отклонениях общей осмотической концентрации. Поскольку большинство растворенных субстанций и молекулы воды довольно легко проходят через эпителий капилляров, происходит быстрое перемешивание всех компонентов (кроме белка) между плазмой крови и интерстициальной жидкостью. Многие факторы, такие, как прием, потеря или ограничение потребления воды, усиленное потребление соли или, наоборот, ее дефицит, смещение интенсивности метаболизма и т.д., способны изменить объем и состав жидкостей тела. Отклонение этих параметров от нормального уровня включает механизмы, корригирующие нарушения водно–солевого гомеостаза [9].
1.2. Физиология водно-солевого обмена
Вода представляет собой важную составную часть организма человека, обеспечивающую активный обмен между клеткой, межклеточной жидкостью и плазмой крови. Обмен воды в организме тесно связан с белками и электролитами. Общая вода организма составляет 70%. На долю внутриклеточной жидкости приходится 50%, внеклеточной — 20%.
Внеклеточная вода включает в себя 15% межуточной и 5% циркулирующей. Растворенные, в воде электролиты обусловливают осмотическое давление. Коллоидно-осмотическое (онкотическое) давление обеспечивается белками. Основными катионами внеклеточной жидкости являются натрий, кальций, магний и калий. Из них первостепенное значение придают натрию. Натрий обеспечивает осмотическое давление, поддерживает нормальную мышечную раздражимость. Основным катионом внутриклеточной жидкости является калий. Устинович А.К. Справочник педиатра по организации медицинской помощи детям / Медицина, 1985. С25-37.
Водно – солевой обмен – это совокупность процессов всасывания, распределения, потребления и выделения воды и солей в организме животных и человека. ВСО обеспечивает постоянство осмотические концентрации, ионного состава и кислотно-щелочного равновесия внутренней среды организма.
Суточная потребность в воде человека весом 70 кг составляет около 2,5 л, из которых 1,2 л поступают в виде питьевой воды, 1 л — с пищей, 0,3 л образуется в организме (при окислении 1 г жира образуется 1,07 г, 1 г углеводов — 0,556 г и 1 г белков — 0,396 г воды). Общее содержание воды в теле человека свыше 60%, в том числе внутри клеток в виде гидратационной и иммобильной воды — 40%, внутри сосудов — 4,5%, в межклеточной жидкости — 16%. В состав организмов входят ионы Na+, К+, Са++, Mg++, Cl-, сульфаты, фосфаты, бикарбонаты; они определяют характер физико-химических процессов в тканях. Организмам необходимы иМикроэлементы— Fe, Zn, Со, Cu и др., которые участвуют в окислительно-восстановительных реакциях, активируют ферменты, входят в состав витаминов и других биологически активных веществ. Всасывание электролитов в кишечнике происходит с участием ферментов и систем активного транспорта ионов. Всосавшиеся ионы поступают в кровь или лимфу и переносятся ко всем клеткам. По солевому составу вне- и внутриклеточные жидкости резко отличаются друг от друга: в клетках преобладают ионы К+, Mg++и фосфаты, вне клеток — ионы Na+, Ca++и Cl-. Это различие поддерживается деятельностью биологических мембран и связыванием ионов химическими компонентами клетки (например, фосфолипидами мозга, мышц и печени больше поглощаются ионы натрия, чем калия). В организме имеются и солевые депо: в костной ткани содержится много Ca, в печени депонируются различные минеральные вещества, в том числе микроэлементы.
Пресноводные животные выделяют воду (поступающую через покровы и с пищей) почками или их аналогами (у беспозвоночных животных); соли они получают с пищей или извлекают из окружающей среды специальными клетками, расположенными в жабрах (у рыб), в коже (у земноводных) и др. Среди морских животных имеются организмы с такой же осмотической концентрацией крови, как и у морской воды (моллюски и др.), и животные, способные к осморегуляции (морские костистые рыбы, пресмыкающиеся и др.). Кровь этих животных содержит меньше солей, чем морская вода; они пьют богатую солями морскую воду и опресняют её, выделяя концентрированные растворы хлористого натрия солевыми железами (носовой железой — пресмыкающиеся и птицы, жабрами — костистые рыбы). Соли магния и кальция удаляются кишечником и почками. Акулы, скаты, некоторые другие морские животные имеют в крови и жидкостях тела высокую концентрацию мочевины, их организм получает воду главным образом через наружные покровы по осмотическому градиенту. У млекопитающих основной орган регуляции водного баланса являются почки, при избытке воды почки выводят разведённую мочу, а при дефиците — концентрированную.
Регуляция ВСО происходит нервно-гормональным путём. При изменении осмотической концентрации крови возбуждаются специальные чувствительные образования (осморецепторы), информация от которых передаётся в центр, нервную систему, а от неё к задней долегипофиза. При повышении осмотической концентрации крови увеличивается выделение антидиуретического гормона, который уменьшает выделение воды с мочой; при избытке воды в организме снижается секреция этого гормона и усиливается её выделение почками. Постоянство объёма жидкостей тела обеспечивается особой системой регуляции, рецепторы которой реагируют на изменение кровенаполнения крупных сосудов, полостей сердца и др.; в результате рефлекторно стимулируется секреция гормонов, под влиянием которых почки изменяют выделение воды и солей натрия из организма.
Наиболее важны в регуляции обмена воды гормоныВазопрессин иГлюкокортикоиды, натрия —Альдостерон и ангиотензин, кальция —паратиреодный гормони кальцитонин. Центральная нервная система координирует деятельность различных органов и систем, обеспечивая водно-солевой гомеостаз. В процессе эволюции регуляция ионного и осмотического постоянства внутренней среды организма становится всё более точной.
Гинецинский А. Г.Физиологические механизмы водно-солевого равновесия / А.Г. Глинецинский // М: Медецина, 1963. – С – 85-93.
Кравчинский Б. Д. Физиология водно-солевого обмена жидкостей тела / Б.Д. Кравчинский // М: Медецина, 1963. – С – 104-112.
Браун Ф. Сравнительная физиология животных, пер. с англ., М., 1967; Pitts R. F., Physiology of the kidney and body fluids, Chi., [1965].
1.3. Осмоляльность плазмы крови
Осмолярность - концентрация осмотически активных частиц в растворе, выраженная в количестве осмолей на килограмм растворителя, плазмы крови - одна из основных констант организма человека, колеблется в незначительных пределах, зависит в основном от концентрации в крови ионов натрия, глюкозы и мочевины.
Осмолярность и осмоляльность представляют собой общую концентрацию растворенных частиц в 1 л раствора (осмолярность) или в 1 кг воды (осмоляльность). Осмоляльность крови в значительной степени зависит от концентрации ионов натрия и хлора, в меньшей степени глюкозы и мочевины. В норме осмоляльность сыворотки крови 275— 296 мосмоль/кг Н20, осмоляльность мочи обусловлена мочевиной, ионами натрия, калия, аммония. Осмоляльность мочи колеблется значительно: от 50 до 1400 мосмоль/кг Н20. При суточном диурезе около 1,5 л осмоляльность мочи здорового человека составляет 600—800 мосмоль/кг Н20.
Кузнецова А.А. Физиология человека / Кузнецова А.А // научный журнал, Биология - 2004 - N 3 - С.103-109
Кузнецова А.А. Физиология человека / Кузнецова А.А // научный журнал, Биология - 2008 -N 5 -С.73-79
При патологических состояниях осмоляльность крови может как снижаться, так и повышаться. Гипоосмоляльность характеризует снижение концентрации натрия в крови при передозировке диуретиков, избыточной продукции антидиуретического гормона, при хронической сердечной недостаточности, циррозе печени с асцитом, глюкокортикоидной недостаточности. Гиперосмоляльность связана с гипернатриемией и наблюдается при сахарном диабете, недостаточности калия, гиперкальциемии, при декомпенсированном сахарном диабете (гипергликемической коме), при гиперальдостеронизме, избыточном введении кортикостероидов, при хронической почечной недостаточности наблюдается увеличение концентрации мочевины (каждые 5 ммоль/л мочевины увеличивают осмоляльность крови на 5 мосмоль/кг Н20), параллельно происходит снижение концентрации натрия в крови, поэтому осмоляльность крови значительно не меняется. Обобщены данные литературы (более 450 источников) о концентрации катионов (Na+, K+, Са2+, Mg2+) и осмоляльности сыворотки крови у человека в зависимости от возраста, при разнообразных физиологических и патологических состояниях, действии физиологически активных веществ. Суммированы данные многих тысяч измерений физико-химических параметров сыворотки крови по данным литературы средние значения осмоляльности и концентрации катионов у здорового человека. Эти величины поддерживаются на стабильном уровне с момента рождения и в течение всей жизни, во многих случаях системы регуляции удерживают их в границах нормы и при разнообразных физиологических и патологических состояниях.
Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин // Физиологический журнал – 2005 -N 3 -С.3-32
Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин //Физиологический журнал - 2008 - N 5 –С.3-32
Повышение осмоляльности сыворотки:
1. Потеря свободной воды.
2. Несахарный диабет.
3. Перегрузка натрием (при ведении натрия гидрокарбоната - NaHCO 3
4. Гипергликемия.
Снижение осмоляльности сыворотки:
1. Введение диуретиков.
2. Синдром неадекватной секреции антидиуретического гормона.
3. Почечная патология (избыточная задержка воды).
4. Надпочечниковая недостаточность.
5. Потеря изотонической жидкости, возмещаемой водой или гипотоническими растворами (рвота изотоническим желудочным содержимым с замещением водой).
Одной из важнейших функций почки человека является участие в осморегуляции организма. Этот физиологический процесс способствует поддержанию постоянства осмотического давления крови, точнее - стабилизации концентрации осмотически активных веществ в плазме крови, а тем самым в жидкостях внутренней среды организма. К ним относятся внеклеточная жидкость, кровь, лимфа. Осмоляльность измеряют с помощью осмометров, физический принцип работы этих устройств в большинстве случаев основан на определении температуры замерзания раствора, криоскопической точки, реже в его основе лежит измерение давления пара. Температура замерзания и давление пара изменяются пропорционально количеству частиц растворенного вещества в 1 кг воды (растворителя). Концентрация осмотически активных веществ рассчитывается в миллиосмоль на 1 кг Н20 в исследуемой жидкости (осмоляльность) или на 1 л раствора (осмолярность).
Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин // Физиологический журнал – 2005 -N 3 -С.3-32
Концентрации глюкозы и мочевины в плазме крови
Глюкоза – это основной источник энергии в организме. Клетки человеческого организма, расщепляя глюкозу, получают энергию, необходимую для поддержания жизнедеятельности. Глюкоза поступает в организм с пищей в составе углеводов (крахмал, сахар и др.). Концентрация глюкозы в крови поддерживается на постоянном уровне за счет работы сложного гормонального механизма. Как повышение, так и понижение уровня глюкозы в крови опасны для здоровья человека. Концентрация глюкозы в крови определяется во время биохимического анализа крови, а также с помощью специальных аппаратов глюкометров. Повышение или понижение уровня глюкозы в крови характерно для некоторых эндокринных болезней.
Уровень глюкозы в крови варьирует в зависимости от приема пищи. После еды сахар крови всегда немного повышается, а затем нормализуется в течение нескольких часов. Повышение уровня глюкозы в крови после еды дает сигнал к выделению инсулина – гормона поджелудочной железы, способствующему усвоению глюкозы клетками организма и понижению ее концентрации в крови. Инсулин также способствует образованию запасов глюкозы в печени в виде гликогена. Параллельно с понижением уровня глюкозы в крови выделение инсулина уменьшается.
Нилссон Л.Х. Гликоген печени человека / Л.Х.Нилссон // Скандинавский журнал клинических и лабораторных исследований - 1973 - № 32 - С. 325-330
Определение уровня сахара в крови осуществляется с помощью биохимического анализа крови. Проведение анализа по измерению глюкозы (сахара) крови рекомендуется осуществлять в утренние часы, натощак (не ранее, чем через 8 часов после последнего приема пищи). Уровень глюкозы определяют в венозной крови (кровь, взятая из вены) или в капиллярной крови (кровь из пальца). В зависимости от метода забора крови для анализа, нормальные показатели сахара крови незначительно варьируют. Так, при анализе капиллярной крови (крови, взятой из пальца), нормальный уровень глюкозы составляет 3,3 – 5,5 ммоль/л. Концентрация сахара в венозной крови немного выше, чем в капиллярной и составляет 4,1 – 5,9 ммоль/л.
Аметов А.С. // Болезни эндокринной системы / А.С. Аметов // Медицина - 2006 - № 3 - С. 52–56
Мочевина - конечный продукт белкового обмена у большинства позвоночных животных и человека. Образуется в печени, выводится с мочой. В промышленности мочевину синтезируют из аммиака и углекислого газа. Применяют для получения синтетических смол, красителей, снотворных средств (барбитала, фенобарбитала), для депарафинизации нефтей; в медицине как мочегонное средство.
Мочевина является главным конечным продуктом обмена аминокислот. Синтезируется мочевина из аммиака, который постоянно образуется в организме при окислительном и неокислительном дезаминировании аминокислот, при гидролизе амидов глутаминовой и аспарагиновой кислот, а также при распаде пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов. Часть аммиака образуется в кишечнике в результате действия бактерий на пищевые белки (гниение белков в кишечнике) и поступает в кровь воротной вены. Аммиак - токсичное соединение. Даже небольшое повышение его концентрации оказывает неблагоприятное действие на организм, и прежде всего - на центральную нервную систему. Несмотря на то, что аммиак постоянно продуцируется в тканях, он содержится в периферической крови лишь в следовых количествах, так как быстро удаляется из кровеносной системы печенью, где входит в состав глутамата, глутамина и мочевины. Биосинтез мочевины является основным механизмом обезвреживания аммиака в организме.
Концентрация мочевины в сыворотке крови здоровых взрослых людей составляет 2,5 - 8,3 ммоль/л (660 мг/л). У женщин, по сравнению со взрослыми мужчинами, концентрация мочевины в сыворотке крови обычно ниже. У пожилых людей (старше 60 лет) наблюдается некоторое увеличение концентрации мочевины в сыворотке крови (примерно на 1 ммоль/л по сравнению с нормой здоровых взрослых людей), что обусловлено снижением у пожилых способности почек концентрировать мочу.
У детей уровень мочевины ниже, чем у взрослых, однако у новорожденных в первые 2 - 3 дня содержание ее может достигать уровня взрослого (проявление физиологической азотемии, обусловленной повышенным катаболизмом на фоне недостаточного поступления жидкости в первые 2 - 3 сут жизни и низкого уровня клубочковой фильтрации). В условиях гипертермии, эксикоза цифры мочевины могут возрасти еще больше. Нормализация наступает к концу первой недели жизни. Уровень мочевины в крови у недоношенных 1 нед. - 1,1 - 8,9 ммоль/л (6,4 - 63,5 мг/100 мл), у новорожденных - 1,4 - 4,3 ммоль/л (8,6 - 25,7 мг/100 мл), у детей после периода новорожденности - 1,8 - 6,4 ммоль/л (10,7 - 38,5 мг/100 мл).
Березов Т. Т. Коровкин Б. Ф. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // - М «Медицина», 1990/ - С. 56 - 83
Марри Р. Биохимия человека / Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. // - том 1 - Москва, «Мир», 1993 г. – С. 90-120.
1.4. Гормоны нейрогипофиза
Гормоны - биологические активные вещества, обладающие строго специфическим и избирательным действием, способные повышать или понижать уровень жизнедеятельности организма [4].
Эндокринный орган отличается тем, что выделяет вещество, необходимое для регуляции клеточной активности каких-то других органов, непосредственно в кровяное русло (термин происходит от греч (endo - внутри и krinein - выделять). Такие органы называются эндокринными железами, а секретируемые ими вещества - гормонами (от греч. hormao - возбуждаю). Каждый гормон влияет на уровень функционирования специфических систем клеток - обычно временно повышает их активность. Гормоны - сильнодействующие агенты, поэтому для получения специфического эффекта достаточны ничтожные их количества. Восприимчивые к гормонам клетки снабжены специальными поверхностными молекулами - «рецепторами», которые реагируют даже на очень низкие концентрации гормонов. После соприкосновения рецептора с гормоном внутри клетки происходит ряд изменений [14].
Гипоталамо-гипофизарная система – это единая система регуляции вегетативных функций организма, в которой важнейшая роль принадлежит нейрогипофизу. Особенностью этого отдела гипофиза является то, что основные гормоны, выделяемые им, синтезируются в гипоталамусе. Полагают, что, с функциональной точки зрения, нейрогипофиз состоит из супраоптических и паравентрикулярных ядер гипоталамуса, гипоталамогипофизарного нервного тракта и задней доли гипофиза. Однако чаще всего нейрогипофизом называют собственно заднюю долю гипофиза [13].
Гормоны, попав в кровоток, должны поступать к соответствующим органам. Транспорт высокомолекулярных (белковых) гормонов изучен мало из-за отсутствия точных данных о молекулярной массе и химической структуре многих из них. Гормоны со сравнительно небольшой молекулярной массой быстро связываются с белками плазмы, так что содержание в крови гормонов в связанной форме выше, чем в свободной; эти две формы находятся в динамическом равновесии. Именно свободные гормоны проявляют биологическую активность.
В конце прошлого века появились первые сообщения о том, что гормоны нейрогипофиза вызывают сокращение стенок кровеносных сосудов. Спустя несколько десятилетий из этой доли гипофизы ыли выделены два гормона пептидной природы: окситоцин и вазопрессин (антидиуретический гормон). Впоследствии было установлено, что они представляют собой нанопептид, имеющиеся у различных позвоночных и вызывающие у млекопитающих, окситоцин - стимуляцию сокращений мускулатуры матки, отделение молока грудными железами и сокращение семявыносящих протоков и яйцеводов [8].
Оказалось, что он образуются, строго говорящие в гипофизе, а в крупноклеточных ядрах переднего гипоталамуса, откуда по нервным волокнам гипоталамо-гипофизарного пути поступают в заднюю долю гипофиза, хранятся в ней и секретируются в кровь [11].
Нейрогипофиз и мозговой слой надпочечника, в отличие от других эндокринных желез, могут быть названы нейрогенными эндокринными железами, так как нейрогипофиз является дериватом мозговой ткани и находится в тесной анатомической и функциональной связи с областью гипоталамуса, а мозговой слой надпочечников имеет общее эмбриологическое происхождение с клетками симпатических ганглиев [2].
1.5. Основные физиологические эффекты окситоцина
Гормон окситоцин – нейропептид – синтезируется в супраоптических и паравентрикулярных ядрах гипоталамуса и транспортируется в заднюю долю гипофиза, где накапливается и выделяется в центральную нервную систему, а затем в кровь. Центральные и периферические эффекты окситоцина многогранны и проявляются как на молекулярном, так и на поведенческом уровне, включая репродуктивную функцию, и непосредственно связаны с активацией окситоциновых рецепторов, экспрессия которых регистрируется в разных тканях организма. В обзоре литературы представлены современные представления о синтезе окситоцина, молекулярных каскадах, инициирующих возбуждение окситоциновых рецепторов, роли окситоцина и рецепторов к окситоцину в регуляции мужской и женской репродуктивной функции, и фолликулогенеза. Тепляшина Е.А. Роль окситоцина в регуляции репродуктивных функций и фолликулогенеза / Е.А. Тепляшина // Сибирский медецинский журнал г. Иркутск - 2013 - № 8 – C – 21-26
Окситоцин — гормон гипоталамуса, который затем транспортируется в заднюю долю гипофиза, где накапливается (депонируется) и выделяется в кровь. Окситоцин был первым пептидным гормоном, чья химическая структура была расшифрована и установлена его биологическая активность. Это было сделано американским химиком Дю Виньо еще в 1953 г. и отмечно Нобелевской премией. Тогда же окситоцин был впервые синтезирован в билогически активной форме [19].
В последние годы появились данные о ранее не известных эффектах окситоцина. Показано, что этот пептид участвует в регуляции процессов запо
минания, потребления пищи и воды, дыхательных функций, метаболических процессов (регуляция углеводного и жирового обмена), иммунного гомеостаза. Окситоцин регулирует состояние сердечно сосудистой системы, что подтверждается обнаружением его в нейронах сердечнососудистых центров ствола мозга и вокруг них [17].
Внутри желудочковое введение окситоцина сопровождается повышением артериального давления (АД), этот эффект, по-видимому, связан со стимуляцией окситоцином рецепторов переднего мозга. Способность окситоцина повышать АД обусловлена не только его сосудосуживающим, но и антидиуретическим действием. Периферическое введение окситоцина напротив, понижает среднее АД у крыс, при этом изменений частоты сердечных сокращений не наблюдается С другой стороны, в отсутствие центральных регуляторных влияний окситоцин способен уменьшать частоту сердцебиений и силу сокращений изолированных предсердий при перфузии сердца крыс [3].
Кроме того, внутрисердечный окситоцин стимулирует выброс атриального натриуретического пептида (ANP). Возможно, окситоцин и ANP действуют сообща, контролируя сердечно сосудистый гомеостаз и состояние внутренней среды организма. Некоторые авторы предполагают, что протекторное действие окситоцина на сердечно сосудистую систему проявляется в большей степени у женщин [10].
1.6. Неклассические эффекты окситоцина
Окситоцин вызывает чувство удовлетворения, снижения тревоги и чувство спокойствия. Многие исследования доказали связь окситоцина в человеческих отношениях, повышении доверия и уменьшения страха. Это позволило предположить, что окситоцин может влиять на области мозга ответственные за поведение, страх и тревогу. Суммированы данные о структуре, синтезе, метаболизме, рецепторах и физиологических эффектах окситоцина. Классическое гормональное действие пептида проявляется в стимуляции сокращения миометрия матки во время родов и усилении лактации при действии на миоэпителиальные клетки грудных желез. Кроме прямых гормональных эффектов этот пептид осуществляет влияние на консолидацию памяти, оказывает антидепрессивное действие, участвует в регуляции сердечно-сосудистой системы. Особое внимание уделено влиянию окситоцина на функциональное состояние различных звеньев системы гемостаза [8,20].
1. Проводниковая функция
2. Стимуляция сокращения матки
3. Влияние на выделение гормонов гипоталамуса, гипофиза и надпочечников
5. Психотропное действие
6. Окситоцин способствует появлению защитных инстинктов
7. Окситоцин вызывает сон
Рассматривая влияния окситоцина на функцию почек, необходимо учитывать многочисленные указания на то, что, несмотря на близость его к АДГ по химическому строению, этот октапептид оказывает иное влияние на мочеотделение: он не тормозит диурез, развившийся после водной нагрузки, и даже может усиливать его, проявляя при этом и натрийуретическое действие. Обычное мочеотделение под влиянием окситоцина также повышается. Эти эффекты особенно четко проявляются на крысах и зависят главным образом от снижения канальцевой реабсорбции воды и натрия. Однако, по данным некоторых авторов, у людей, а также у мышей эти эффекты окситоцина не обнаруживаются, при этом причина видовых отличий остается неясной. В связи с этим отметим, что снижение реабсорбции натрия под влиянием окситоцина найдена и в опытах на морских костистых рыбах (В. Ф. Васильева, 1966). Берехин Е.Б. Фармакология почек и ее физиологические основы / Е.Б Берехин // М.: Медецина, 1979. – С. – 23.
Вандер А. Физиология почек / А.Вандер // М.: Медецина, 2000. – С. – 43
Так же окситоцин может незначительно уменьшать выделение мочи. У некоторых видов, окситоцин может стимулировать выделение натрия почками, а у людей, высокие дозы окситоцина могут привести к недостатку натрия.
Окситоцин и рецепторы окситоцина, находится в самом сердце у некоторых грызунов, а гормон может играть роль в эмбриональном развитии сердца путем содействия дифференциации кардиомиоцитов. Однако недостаток либо окситоцина или его рецепторов у лабораторных мышей не приводит к сердечной недостаточности [11].
Окситоцин, вырабатываемый в мозгу не во время стрессовых ситуаций, клонит человека ко сну, в этом есть смысл, потому что окситоцин контролирует уровень кортизола в крови, который известен как гормон стресса. "Он обладает успокаивающим эффектом и помогает заснуть".
Влияние окситоцина на функции центральной нервной системы
Нейрогипофизарные гормоны играют важную роль в регуляции многих процессов в ЦНС [1].
Окситоцин может разнонаправлено изменять двигательную активность экспериментальных животных, причем эффекты зависят от дозы пептида. Как отмечено ранее, окситоцин имеет отношение к регуляции поведенческой активности, связанной с беременностью и лактацией. Он участвует в формировании социального поведения, такого как материнское поведение, забота о потомстве, агрессивное поведение самцов и лактирующих самок, сексуальное поведение, поиск и защита партнера и взаимоотношения с ним [6].
В психиатрии считается, что окситоцин ответственен за такую симптоматику, как заблуждение и галлюцинации. Окситоцин является антагонистами в отношении познавательных функций. Окситоцин, в зависимости от дозы частично или полностью ослабляет социальную память. Этот пептид назван “амнестическим нейропептидом”, так как известна его способность ухудшать консолидацию памяти. При введении окситоцина животным в малых дозах ухудшается обучение крыс в тестах с отрицательным подкреплением. При использовании высоких доз пептид оказывает стимулирующее влияние на обучение животных в U-образном лабиринте. Также активируется обучение с положительным подкреплением [1].
Глава 2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
Целью данного исследования являлось изучение влияния окситоцина на объем общей воды в организме крыс.
Для осуществления данной цели были поставлены следующие задачи:
1. Изучение литературы по теме исследования.
2. Определение объема общей воды в организме интактных крыс и после введения окситоцина.
3. Определение концентрации глюкозы и мочевины в плазме крови интактных крыс и после введения окситоцина.
4. Определение концентрации натрия в плазме крови и в эритроцитах интактных крыс и после введения окситоцина.
5. Определение осмоляльности плазмы крови интактных крыс и после введения окситоцина.
2.2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектом исследования являлись 4 беспородных крыс, (самцы) массой 250-400г. Животные содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище, с естественным световым режимом, при температуре 18 - 20С. Крысам в течение 5 дней внутрибрюшинно вводился окситоцин в объеме 0,1 мл на 0,5 мл физиологического раствора на крысу.
Перед проведением операции крысу взвешивали и подвергали наркотизации, для чего применялся ингаляционный наркоз - хлороформ. Наркотизированную крысу обездвиживали фиксацией к операционному столику.
Определение общей воды по антипирину
Антипирин (АП) вводился внутрибрюшинно из расчета 20 мг АП в 0,5 мл физиологического раствора. Через час осуществляли забор крови из сердца.
Кровь центрифугировали при 3000 об/мин. Отбирали плазму. К 1 мл плазмы крови добавить 5% раствор ТХУ и центрифугип3000 об/мин отобрать супернатант. А) К 3 мл супернатанта добавить 20 мкл 4 N раствора серной кислоты. Колориметрировать при длине волны 364 нм. B) Затем к этому раствору добавить 40 мкл 2 % раствора нитрита натрия. Колориметрировать при длине волны 364 нм. 3. От 2 отнять 1, результат определить по калибровочному графику. Расчет ОВ производится по формуле:
ОВ = кол-во введенного АП ´ 100 / количество АП по калибровке ´ массу крысы, полученный результат умножить на кратность разведения плазмы раствором ТХУ.
Определение концентрации натрия
Определения концентрации натрия в плазме крови и эритроцитах осуществляли методом пламенной фотометрии.
Определение осмоляльности плазмы
Осмоляльность плазмы (ОСМ) крови определяли по формуле:
ОСМ = 2 ´ [концентрация натрия] (ммоль/л) + [концентрация глюкозы] (ммоль/л) + [концентрация мочевины] (ммоль/л) (мОсм / кг H2O)
2.3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В результате проведенных исследований было установлено, что у интактных крыс ОВ составил 6,6 мл/100 г массы, после введения животным окситоцина - 4 мл/100 г массы. Введение крысам окситоцина вызывало снижение ОВ на 39,4 %, а - (табл.1, рис. 4).
Таблица 1
Объем общей воды в организме крыс
| Серии эксперимента | ОВ (мл/100 г массы) |
| Интактные крысы (Контроль) | 6,6 ± 0,05 |
| Интактные крысы (Введение физиологического раствора) | 6,6 ± 0,02 |
| После введения окситоцина | 4,0 ± 0,1* |
* - Достоверность отличий по сравнению с контролем
Рис. 1 Объем общей воды
Таблица 2
Концентрация глюкозы и мочевины в плазме крови крыс
| Серии эксперимента | Концентрация глюкозы (ммоль/л) | Концентрация мочевины (ммоль/л) |
| Интактные крысы (Контроль) | 5,647 ± 0,600 | 5,382 ± 0,306 |
| Интактные крысы (Введение физиологического раствора) | 5,647 ± 0,600 | 5,382 ± 0,306 |
| После введения окситоцина | 6,829 ± 0,367 | 12,571 ± 0,920* |
* - Достоверность отличий по сравнению с контролем
Рис. 2 Концентрация глюкозы и мочевины
 |
Таблица 3
Концентрация натрия и осмоляльность плазмы крови крыс
| Серии эксперимента | Концентрация натрия (ммоль/л) | Осмоляльность плазмы крови (мОсм/кг) | |
| В плазме | В эритроцитах | ||
| Интактные крысы (Контроль) | 120,167 ± 0,167 | 14,867 ± 1,049 | 251,033 ± 0,642 |
| Интактные крысы (Введение физиологического раствора) | 101,667 ± 1,667* | 11,367 ± 0,033* | 210,5 ± 0,526* |
| После введения окситоцина | 131,485 ± 5,702* | 6,806 ± 2,054 | 265,93 ± 10,660 |
* - Достоверность отличий по сравнению с контролем
Рис. 3 Концентрация натрия и осмоляльности
ВЫВОДЫ
1. Изучили литературу по теме исследования.
2. Определили объем общей воды в организме интактных крыс и после введения окситоцина.
3. Определили концентрацию глюкозы и мочевины в плазме крови интактных крыс и после введения окситоцина.
4. Определили концентрацию натрия в плазме крови и в эритроцитах интактных крыс и после введения окситоцина.
5. Определение осмоляльности плазмы крови интактных крыс и после введения окситоцина.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1. Аметов А.С. // Болезни эндокринной системы / А.С. Аметов // Медицина. – 2006. - № 3 - С. 52–56.
2. Аничков Н.Н. Секреция гормонов гипофиза и коры надпочечников регулируется центральной нервной системой в соответствии с потребностями организма / Н.Н. Аничков // Физиологический журнал СССР. - 1950. - № 36. – С. 11-12.
3. Ашмарин И.П. Нейрохимия / И.П. Ашмарин // М.: ИБХ РАМН. - 1996. - 469 c.
4. Баранов В.Г. Руководство по клинической эндокринологии / В.Г Баранов // Медицина, 1977. - 664 c.
5. Берехин Е.Б. Фармакология почек и ее физиологические основы / Е.Б Берехин // М.: Медецина, 1979. - С. - 23 - 48.
6. Березов Т.Т. Биологическая химия/ Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // М: Медицина, 1990. - 528 c.
7. Березов Т. Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин // - М «Медицина», 1990. - С. 56 - 83.
8. Браун Ф. Сравнительная физиология животных / Ф. Браун Ф // пер. с англ, М, 1967. С. 49 – 85.
9. Быков К.М. Кора головного мозга и внутренние органы / К.М. Быков // - М, «Медицина», 1945. - 362 c.
10. Вайдо А.И. Сравнительно-генетический анализ возбудимости нервной системы / А.И. Вайдо, Ю.С.Дмитриев // Генетика, 1983. - № 19 – С. – 54-103.
11. Вандер А. Физиология почек / А.Вандер // М.: Медецина, 2000. - С. – 4 – 33.
12. Гинецинский А. Г.Физиологические механизмы водно-солевого равновесия / А.Г. Глинецинский // М: Медецина, 1963. – С – 85-93.
13. Григорьева М.Е. Нейрохимия / М.Е. Григорьева, М.Е. Голубева // Вестн. МГУ. Сер. Биология. - 2004. - № 3 - С. – 18 – 45.
14. Григорьева М.Е. Окситоцин: строение, синтез, рецепторы и основные эффекты / М.Е Григорьева, М.Г. Голубева // Нейрохимия. № 2. - 2010. - С. 93-101.
15. Иванова Л.Н. физиологические механизмы регуляции водно - солевого баланса у животных и человека / Л.Н. Иванова// Соросовский образовательный журнал, Биология. - 1996 - № 10 – С.1-2.
16. Константинова М.С. Гормоны нейрогипофиза - вазопрессин и окситоцин / М.С Константинова, Ю.В. Наточин // Физиология эндокринной системы. Ред. Баранов В.Г. Л.: Наука, 1979. - С. 90-91.
17. Кравчинский Б.Д. Физиология водно - солевого обмена жидкостей тела/ Б.Д. Кравчинский // Государственное издательство медицинской литературы. – 1963. – С. 1-2.
18. Кузнецова А.А. Физиология человека / Кузнецова А.А // научный журнал, Биология. - 2004 - № 3 - С. 103-109.
19. Лейкок Д.Ф. Основы эндокринологии / Д.Ф.Лейкок, П.Г.Вайс // М.: Медицина. - 2000. – 502 c.
20. Марри Р. Биохимия человека / Р. Марри, Д.Греннер // Москва, «Мир». – 1993. - Том. 1. – С. 90-120.
21.Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин // Физиологический журнал. – 2005 - № 3. - С. 3-32.
22. Наточин Ю.В. Успехи физиологических наук / Ю.В Наточин // Физиологический журнал. - 2008 - № 5. – С. 15 – 59.
23. Нилссон Л.Х. Гликоген печени человека / Л.Х.Нилссон // Скандинавский журнал клинических и лабораторных исследований. – 1973. - № 32 - С. 325-330.
24. Розен В. Б.Основы эндокринологии / В. Б.Розен - 3-е изд. - М.: Изд. МГУ: Медицина. - 1994. - С. 40-41.
25. Смирнов А.Н. Элементы эндокринной регуляции / А.Н. Смирнов // Медецина. - 2006. - 351 с.
26. Сперанская А.Д. Физиологичексий журнал / А. Д. Сперанский // CCCP. - 1956. - № 52. - С. 5 – 45.
27. Тепляшина Е.А. Роль окситоцина в регуляции репродуктивных функций и фолликулогенеза / Е.А. Тепляшина // Сибирский медецинский журнал - 2013 - № 8 - C - 21- 45.
28. Устинович А.К. Справочник педиатра по организации медицинской помощи детям / А.К. Устинович // Медицина. - 1985. - С. 25-37.
29. Bernal A. Oxytocin polyuria and polydipsia is NaCl in food-deprived male rats / A. Bernal, J. Mahia, C.Garcia del Rio, A. Puerto // J. Neuroendocrinol. - 2010 - № 10 - p. 1043-1051.
30. Claud Bernard. Lecons sur les proprieties physiologiques et les alterations pathologiques de liquids de organism. - 1859 - № 14 - p. 102 – 145.
31. Douglas A.J. Quo vadis neurohypophysial hormone research // Exp. Physiol. 2000 - № 85 - p. 257-272.
32. Petersson M. Steroid dependent effects of oxytocin on spontaneous motor activity in female rats / М. Petersson // Brain Res Bull. - 1998 - № 45 – 305 p.
Пат. 6894026, МКИ{7} A61K 38/00. Long-acting oxytocin analogues for the treatment and prevention of breast cancer and psychiatric disorders = Пролонгированные аналоги окситоцина для лечения и профилактики рака молочной железы и психических заболеваний / Quav Steven C.,Atossa Healthcare, Inc. — N 09/678591; Заявл. 03.11.00; Опубл. 03.11.00.— ОНКОЛОГИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ.— 2006.— N 3.
Патентуют методы и составы для профилактики и лечения рака молочной железы и психических заболеваний, состоящие во введении терапевтически эффективного количества карбетоцина и/или другого пролонгированного аналога окситоцина. Карбетоцин может вводиться в фармакологически приемлемом носителе внутримышечно, внутривенно, интраназально, внутрилегочно и др. способами. Приводят примеры эффективности карбетоцина против рака молочной железы человека у мышей и при лечении психических нарушений у взрослых больных.
Rasmussen, M.S. Effects of oxytocin in normal man during low and high sodium diets = Эффекты окситоцина у здорового человека, получающего низко- и высокосолевой рацион / Rasmussen M.S.,Simonsen J.A.,Sandgaard N.C.F.,Hoilund-Carlsen P.F.,Bie P. // Acta physiol. scand.. N 2.— 2004.— 247-258.— ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭНДОКРИННАЯ СИСТЕМА. РАЗМНОЖЕНИЕ. ЛАКТАЦИЯ).— 2006.— N 6.
Обследовали 14 здоровых мужчин, получавших 30 ммоль NaCl/дн (низкосолевой рацион; НСР) или 230 ммоль NaCl/дн (высокосолевая диета; ВСР) в течение 4 дн. Через 4 дн испытуемым в/в инфузионно вводили окситоцин (ОКС) в дозе 1 пмоль/кг/мин в течение 240 мин. Во время инфузии ОКС не было отмечено изменения ср. АД, частоты сердечных сокращений и скорости клубочковой фильтрации. ОКС снижал мочеобразование в ср. с 4,2 до 0,75 и с 4,6 до 1,4 мл/мин при НСР и ВСР соотв. ОКС уменьшал конц-ии ренина, ангиотензина II, альдостерона в плазме крови и почечную экскрецию метаболитов оксида азота нитрата и нитрита. ОКС уменьшал экскрецию натрия и калия в ср. с 11 до 4 и с 93 до 42 мкмоль/мин соотв. Конц-ии предсердного натрийуретического пептида (ПНП) и цГМФ в плазме крови не изменялись после НСР. Сходные изменения были отмечены и при ВСР, однако в этом случае антинатрийуретическое действие ОКС было сходным с контролем. Сделан вывод, что действие ОКС на натрийурез у здорового человека не связано с оксидом азота и/или ПНП. Дания, Univ. of Southern Denmark, Winslowparken, DK-5000.
Amico, J.A. Anxiety and stress responses in female oxytocin deficient mice = Тревожная и стрессорная реакции у самок мышей с недостаточностью окситоцина / Amico J.A.,Mantela R.C.,Vollmer R.R.,Li X. // J. Neuroendocrinol.. N 4.— 2004.— 319-324.— ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭНДОКРИННАЯ СИСТЕМА. РАЗМНОЖЕНИЕ. ЛАКТАЦИЯ).— 2006.— N 6.
У самок мышей с делецией гена окситоцина психогенный стресс вызывал более выраженное тревожное состояние и усиливал секрецию кортикостерона по сравнению с животными дикого типа. Одновременно развивалась повышенная гипертермия. Характер суточных колебаний секреции кортикостерона и ее реакция на введение КРГ существенно не изменялись. Экспрессия иммунореактивного Fos-белка, служившего показателем активации нейронов, в медиальном отделе миндалины в базальных условиях оставалась нормальной, но под действием стресса усиливалась сильнее, чем в контроле. Полученные результаты подтверждают гипотезу, согласно которой окситоцин ЦНС обладает анксиолитической активностью и ослабляет реакцию на психогенное стрессорное воздействие. Библ. 45.
ГригорьеваМ.Е.,. ОКСИТОЦИН: СТРОЕНИЕ, СИНТЕЗ, РЕЦЕПТОРЫ И ОСНОВНЫЕ ЭФФЕКТЫ / ГригорьеваМ.Е.,ГолубеваМ.Г. // Нейрохимия. N 2.— 2010.— 93-101.— БИОХИМИЯ.— 2010.— N 11.
Суммированы данные о структуре, синтезе, метаболизме, рецепторах и физиологических эффектах окситоцина. Классическое гормональное действие пептида проявляется в стимуляции сокращения миометрия матки во время родов и усилении лактации при действии на миоэпителиальные клетки грудных желез. Кроме прямых гормональных эффектов этот пептид осуществляет влияние на консолидацию памяти, оказывает антидепрессивное действие, участвует в регуляции сердечно-сосудистой системы и натриуреза. Особое внимание уделено влиянию окситоцина на функциональное состояние различных звеньев системы гемостаза.
Kunchulia, M. Effects of oxytocin on behaviour and memory in rats subjected to chronic restrained stress = Влияние окситоцина на поведение и память крыс в условиях иммобилизационного стресса / Kunchulia M.,Bolkvadze T.,Zhvania M.,Kotaria N.,Kiladze M. // Georg. Med. News. N10.— 2010.— 56-60.— ФАРМАКОЛОГИЯ ОБЩАЯ. ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА.— 2011.— N 5.
Изучено влияние окситоцина на поведение и память крыс в условиях 21-дневного иммобилизационного стресса. В условиях иммобилизационного стресса животным подопытной группы окситоцин вводился ежедневно в дозе 1 мг/кг. Для оценки эмоционального состояния и памяти крыс были использованы тесты "открытое поле" (день 22-й) и "fear conditioning" (день 23-й, 24-й). Эксперимент выявил в группе животных, к-рые подвергались премедикации окситоцином, увеличение продолжительности времени нахождения в центре "открытого поля". Окситоцин, очевидно, снижает реакцию страха. Иммобилизационный стресс понижает р-цию замирания, независимо от того, вводился окситоцин или нет. Считаем, что окситоцин не предотвращает повреждение памяти, вызванное стрессом. Согласно полученным данным, окситоцин при стрессе принимает участие в регуляции эмоций и памяти различными путями. Грузия, Ин-т физиологии им. И. Бериташвили, Тбилиси.
Bernal, A. Oxytocin polyuria and polydipsia is blocked by NaCl administration in food-deprived male rats = Индуцированные окситоцином полиурия и полидипсия у голодных крыс-самцов блокируется введением NaCl / Bernal A.,Mahia J.,Garcia del Rio C.,Puerto A. // J. Neuroendocrinol.. N10.— 2010.— 1043-1051.— ФИЗИОЛОГИЯ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (ЭНДОКРИННАЯ СИСТЕМА. РАЗМНОЖЕНИЕ. ЛАКТАЦИЯ).— 2011.— N 7.
Голодание и подкожное введение окситоцина крысам усиливали у них мочеотделение, но снижали потребление воды. Введение им гипертонического раствора NaCl или возобновление кормления блокировало индукцированные окситоцином полиурию и полидипсию, но стимулировало потребление воды. Т. обр., эти эффекты окситоцина ассоциируются с отрицательным балансом натрия и воды.
1. Серая И.П. Современные представления о биологической роли оксида азота / И.П. Серая, Я.Р. Нарциссов // Успехи современ. биол. – 2002. – Т. 122, № 3. – С. 249 – 258.
2. Шанин В.Ю. Клиническая патофизиология / В.Ю. Шанин // - СПб.: Наука, 1998. – 821 с.
3. Edelman I.S. Anatomy of body water and electrolytes / I.S. Edelman, J. Leibman // Am. J. Med. − 1952. −Vol. 171. − P. 279-296.
