Среди основных форм микроорганизмов выделяют следующие группы: бактерии, грибы, вирусы, простейшие. Особой группой являются микоплазмы.
Грибы – растительные микроорганизмы, характеризующиеся следующими основными признаками: в протоплазме располагаются несколько ядер с двойной мембраной, ядрышком и хромосомами, а также рибосомы, митохондрии, лизосомы, вакуоли, включения гликогена, волютина, развитая эндоплазматическая сеть. Клеточная стенка толстая, прочная, содержит хитин, хитинозан, целлюлозу. С возрастом клеточная стенка утолщается, иногда в ней откладываются высокомолекулярные липиды, минеральные соли, пигменты. Тело мицеллярных грибов представляет собой систему из ветвящихся, разделенных или неразделенных перегородками нитей – гиф, которые образуют мицелий. У дрожжевых и дрожжеподобных грибов форма тела палочковидная, овальная или шаровидная. Размеры мицелярных грибов 1 – 10 х 100 мкм, дрожжей 1,5 – 6 х 1,5 – 8 мкм.
Способы размножения многообразны:
1 – вегетативный способ, при котором мицелий распадается на фрагменты с образованием артро – или хламидоспор;
|
|
2 – бесполое размножение состоит в образовании эндо – или экзоспор на специальных изолированных гифах – спорангиях;
3 – половые способы проявляются в слиянии двух гаплоидных ядер или фрагментов мицелия с последующим редуцированным делением гаметы (мейоз). Различают низшие (хитридиомицеты, гифохитридиомицеты, оомицеты, зигомицеты) и высшие (аскомицеты, базидиомицеты, дейтеромицеты) грибы. Для изучения морфологии грибов применяется микроскопия нативных препаратов, приготовленных по типу препарата «раздавленная капля».
Простейшие – одноклеточные животные организмы, имеющие формы шара, овоида, боба, рыбы. Размеры колеблются от 1 – 2 до сотни и более мкм. Простейшиеимеют одно, реже два и более ядер, в ядре выявляется до 6 хромосом. Кариоплазма хорошо выражена. В центре располагается ядрышко. Цитоплазма нередко разделяется на эктоплазму, имеющую гелеобразную консистенцию, и жидкую эндоплазму. В эндоплазме присутствуют митохондрии, эндоплазматическая сеть, аппарат Гольджи, рибосомы, иногда вакуоли, включения гликогена. Оболочка типа пелликулы или кутикулы. Некоторые виды могут превращаться в форму покоя – цисту. Для изучения простейших прибегают к исследованию нативных препаратов, а также окрашенных по Романовскому – Гимза после фиксации смесью Никифорова, этиловым или метиловым спиртом. Для выявления простейших в крови готовят препараты «толстая петля», которые окрашивают по Романовскому – Гимза.
Микоплазмы – уникальная группа мелких грамотрицательных бактерий, отличающихся полным отсутствием клеточной стенки. Это полиморфные сферические, эллипсоидные (размерами 0,2 – 1,5 мкм) и нитевидные ветвящиеся клетки (длиной до 150 мкм). Благодаря малым размерам микоплазмы могут фильтроваться через бактериальные фильтры. Не образуют спор, обычно неподвижны. Название подчёркивает их пластичность и то, что они имеют гомогенную консистенцию.
|
|
В отдельные группы выделены микроорганизмы переходных форм:
Актиномицеты (actis – луч, myces – гриб) – бактерии, по внешнему виду сходные с мицеллярными грибами. Мицелий большинства актиномицетов имеет форму тонких (0,2 – 2 мкм) ветвящихся, разделенных или неразделенных перегородками нитей – гиф. Кроме мицеллярной, встречаются палочковидная и кокковидная формы. От грибов отличаются строением ядра (нуклеоид), клеточной стенки (содержат пептидогликаны и не содержат хитин и целлюлозу), чувствительностью к антибактериальным препаратам. Бывают подвижные и неподвижные виды. Капсул не образуют. Грамположительные и грамотрицательные. Размножаются с помощью спор, которые формируются в результате сегментации и фрагментации гиф. Описан половой способ размножения. Для изучения актиномицетов готовят окрашенные препараты или препарат «раздавленная капля».
Спирохеты (spira – виток, chaite – волосы) – тонкие спирально извитые подвижные микроорганизмы, которые обладают признаками бактерий (отсутствие дифференцированного ядра, способ размножения) и простейших (осевая нить, активно сокращающееся тело). Размеры клеток 0,05 – 3 х 5 – 500 мкм. Нить растянута на всю длину клетки, выполняет локомоторную и опорную функции, содержит пучок в 2 – 150 фибрилл белка флагеллина и аминосахара. В неблагоприятных условиях спирохеты могут переходить в цисту, представляющую собой укороченную и свёрнутую в спираль, окруженную толстой слизистой оболочкой спирохету. Грамотрицательные, но в процессе окраски по этому методу тело спирохет часто разрушается. Для их выявления исследуют нативные препараты при помощи темнопольной или фазово–контрастной микроскопии, а также препараты, окрашенные Романовскому – Гимза или методом серебрения по Морозову.
Группа бактерий, которые аналогично вирусам являются облигатными внутриклеточными паразитами, включает риккетсий и хламидий.
Риккетсии – мелкие (0,3 – 0,6 х 0,4 – 2 мкм) полиморфные грамотрицательные бактерии, названные в честь американского микробиолога Г. Риккетса. жизненный цикл риккетсий зависит от жизнедеятельности клетки – хозяина и складывается из 2 стадий – вегетативной и покоящейся. В вегетативной стадии они имеют палочковидную форму, активно размножаются путем бинарного деления и обладают активной подвижностью. В покоящейся стадии имеют сферическую форму и не размножаются. Риккетсии – типичные прокариоты. Для их выявления применяется окраска препарата по Романовскому – Гимза.
Хламидии – мелкие аспорогенные бескапсульные грамотрицательные неподвижные бактерии. Вне клеток хозяина хламидии существ уют в виде элементарных телец сферической формы размерами 0,3 мкм. В клетке хозяина они превращаются в ретикулярные тельца (диаметром 1 мкм), которые начинают делиться. Особи конечного деления превращаются в элементарные тельца, располагающиеся в цитоплазме в виде микроколоний, окруженных общей мембраной (хламидой). По Романовскому – Гимза элементарные тельца окрашиваются в красный цвет, ретикулярные – в голубой.
ЗАДАНИЕ
1. Приготовить препараты «раздавленная капля» из грибов и актиномицетов, для чего в каплю воды на предметном стекле внести кусочек мицелий или тела гриба, тщательно расщепить его и накрыть покровным стеклом. Микроскопировать с сухой системой. Обратить внимание на строение мицелия, органов плодоношения.
|
|
2. Приготовить фиксированные препараты дрожжевых грибов, окрасить фуксином или метиленовым синим, микроскопировать. Обратить внимание на форму клеток, наличие признаков почкования.
3. Изучить морфологию простейших в готовых окрашенных препаратах. Приготовить препарат «толстой капли» из крови.
Приготовление препарата «толстая капля»
На предметное стекло нанести две капли крови, которые равномерно распределить в виде пятна с 10 – копеечную монету. Нефиксированный препарат окрасить по Романовскому – Гимза.
Окраска по Романовскому – Гимза
Краска Романовского – Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Цитоплазма окрашивается в голубой цвет, ядро – в красно – фиолетовый. Перед окраской 20 капель краски добавить к 10 мл дистиллированной воды и налить её на препарат на 30 – 40 минут, после чего краску слить, препарат промыть водой, высушить и микроскопировать.
4. Ознакомиться с морфологией спирохет в окрашенных по Романовскому – Гимза препаратах и в нативных препаратах при темнопольной микроскопии.
Техника темнопольной микроскопии
С помощью осветителя и его диафрагмы равномерно освещают зеркало микроскопа и вращением его добиваются появления на верхней линзе конденсора освещенного кольца. На поверхность конденсора наносят каплю дистиллированной воды, препарат «раздавленная капля» кладут на столик микроскопа и конденсор поднимают до соприкосновения с предметным стеклом. Устанавливают большой сухой объектив, находят объект, с помощью зеркала достигают максимальной освещенности поля зрения, после чего добиваются резкости изображения. На тёмном фоне видны спирохеты в виде тонких, блестящих, спиралевидно закрученных нитей.
5. Изучить морфологию риккетсий, хламидий, микоплазм в готовых препаратах.
Контрольные вопросы
1. Каковы основные различия в ультраструктуре клеток прокариотических и эукариотических микроорганизмов?
2. Чем характеризуются микоплазмы?
3. Как устроены клетки микроскопических грибов?
|
|
4. Какими способами размножаются грибы?
5. Чем отличаются низшие грибы от высших?
6. Каковы морфологические особенности простейших?
7. Какие микроорганизмы относят к переходным формам и чем они характеризуются?
8. Каковы особенности строения актиномицетов?
9. Какое строение имеют спирохеты?
10. Каковы отличительные особенности риккетсий и хламидий?
11. Какими методами изучаются грибы и актиномицеты?
12. Какие методы исследования применяют для выявления спирохет и простейших?