double arrow

ТЕМА 4. микроскопический метод исследования: морфология клеточных форм микроорганизмов


Среди основных форм микроорганизмов выделяют следующие группы: бактерии, грибы, вирусы, простейшие. Особой группой являются микоплазмы.

Грибы – растительные микроорганизмы, характеризующиеся следующими основными признаками: в протоплазме располагаются несколько ядер с двойной мембраной, ядрышком и хромосомами, а также рибосомы, митохондрии, лизосомы, вакуоли, включения гликогена, волютина, развитая эндоплазматическая сеть. Клеточная стенка толстая, прочная, содержит хитин, хитинозан, целлюлозу. С возрастом клеточная стенка утолщается, иногда в ней откладываются высокомолекулярные липиды, минеральные соли, пигменты. Тело мицеллярных грибов представляет собой систему из ветвящихся, разделенных или неразделенных перегородками нитей – гиф, которые образуют мицелий. У дрожжевых и дрожжеподобных грибов форма тела палочковидная, овальная или шаровидная. Размеры мицелярных грибов 1 – 10 х 100 мкм, дрожжей 1,5 – 6 х 1,5 – 8 мкм.

Способы размножения многообразны:

1 – вегетативный способ, при котором мицелий распадается на фрагменты с образованием артро – или хламидоспор;

2 – бесполое размножение состоит в образовании эндо – или экзоспор на специальных изолированных гифах – спорангиях;

3 – половые способы проявляются в слиянии двух гаплоидных ядер или фрагментов мицелия с последующим редуцированным делением гаметы (мейоз). Различают низшие (хитридиомицеты, гифохитридиомицеты, оомицеты, зигомицеты) и высшие (аскомицеты, базидиомицеты, дейтеромицеты) грибы. Для изучения морфологии грибов применяется микроскопия нативных препаратов, приготовленных по типу препарата «раздавленная капля».

Простейшие – одноклеточные животные организмы, имеющие формы шара, овоида, боба, рыбы. Размеры колеблются от 1 – 2 до сотни и более мкм. Простейшиеимеют одно, реже два и более ядер, в ядре выявляется до 6 хромосом. Кариоплазма хорошо выражена. В центре располагается ядрышко. Цитоплазма нередко разделяется на эктоплазму, имеющую гелеобразную консистенцию, и жидкую эндоплазму. В эндоплазме присутствуют митохондрии, эндоплазматическая сеть, аппарат Гольджи, рибосомы, иногда вакуоли, включения гликогена. Оболочка типа пелликулы или кутикулы. Некоторые виды могут превращаться в форму покоя – цисту. Для изучения простейших прибегают к исследованию нативных препаратов, а также окрашенных по Романовскому – Гимза после фиксации смесью Никифорова, этиловым или метиловым спиртом. Для выявления простейших в крови готовят препараты «толстая петля», которые окрашивают по Романовскому – Гимза.

Микоплазмы – уникальная группа мелких грамотрицательных бактерий, отличающихся полным отсутствием клеточной стенки. Это полиморфные сферические, эллипсоидные (размерами 0,2 – 1,5 мкм) и нитевидные ветвящиеся клетки (длиной до 150 мкм). Благодаря малым размерам микоплазмы могут фильтроваться через бактериальные фильтры. Не образуют спор, обычно неподвижны. Название подчёркивает их пластичность и то, что они имеют гомогенную консистенцию.

 

В отдельные группы выделены микроорганизмы переходных форм:

Актиномицеты (actis – луч, myces – гриб) – бактерии, по внешнему виду сходные с мицеллярными грибами. Мицелий большинства актиномицетов имеет форму тонких (0,2 – 2 мкм) ветвящихся, разделенных или неразделенных перегородками нитей – гиф. Кроме мицеллярной, встречаются палочковидная и кокковидная формы. От грибов отличаются строением ядра (нуклеоид), клеточной стенки (содержат пептидогликаны и не содержат хитин и целлюлозу), чувствительностью к антибактериальным препаратам. Бывают подвижные и неподвижные виды. Капсул не образуют. Грамположительные и грамотрицательные. Размножаются с помощью спор, которые формируются в результате сегментации и фрагментации гиф. Описан половой способ размножения. Для изучения актиномицетов готовят окрашенные препараты или препарат «раздавленная капля».

Спирохеты (spira – виток, chaite – волосы) – тонкие спирально извитые подвижные микроорганизмы, которые обладают признаками бактерий (отсутствие дифференцированного ядра, способ размножения) и простейших (осевая нить, активно сокращающееся тело). Размеры клеток 0,05 – 3 х 5 – 500 мкм. Нить растянута на всю длину клетки, выполняет локомоторную и опорную функции, содержит пучок в 2 – 150 фибрилл белка флагеллина и аминосахара. В неблагоприятных условиях спирохеты могут переходить в цисту, представляющую собой укороченную и свёрнутую в спираль, окруженную толстой слизистой оболочкой спирохету. Грамотрицательные, но в процессе окраски по этому методу тело спирохет часто разрушается. Для их выявления исследуют нативные препараты при помощи темнопольной или фазово–контрастной микроскопии, а также препараты, окрашенные Романовскому – Гимза или методом серебрения по Морозову.

Группа бактерий, которые аналогично вирусам являются облигатными внутриклеточными паразитами, включает риккетсий и хламидий.

Риккетсии – мелкие (0,3 – 0,6 х 0,4 – 2 мкм) полиморфные грамотрицательные бактерии, названные в честь американского микробиолога Г. Риккетса. жизненный цикл риккетсий зависит от жизнедеятельности клетки – хозяина и складывается из 2 стадий – вегетативной и покоящейся. В вегетативной стадии они имеют палочковидную форму, активно размножаются путем бинарного деления и обладают активной подвижностью. В покоящейся стадии имеют сферическую форму и не размножаются. Риккетсии – типичные прокариоты. Для их выявления применяется окраска препарата по Романовскому – Гимза.

Хламидии – мелкие аспорогенные бескапсульные грамотрицательные неподвижные бактерии. Вне клеток хозяина хламидии существ уют в виде элементарных телец сферической формы размерами 0,3 мкм. В клетке хозяина они превращаются в ретикулярные тельца (диаметром 1 мкм), которые начинают делиться. Особи конечного деления превращаются в элементарные тельца, располагающиеся в цитоплазме в виде микроколоний, окруженных общей мембраной (хламидой). По Романовскому – Гимза элементарные тельца окрашиваются в красный цвет, ретикулярные – в голубой.

ЗАДАНИЕ

1. Приготовить препараты «раздавленная капля» из грибов и актиномицетов, для чего в каплю воды на предметном стекле внести кусочек мицелий или тела гриба, тщательно расщепить его и накрыть покровным стеклом. Микроскопировать с сухой системой. Обратить внимание на строение мицелия, органов плодоношения.

2. Приготовить фиксированные препараты дрожжевых грибов, окрасить фуксином или метиленовым синим, микроскопировать. Обратить внимание на форму клеток, наличие признаков почкования.

3. Изучить морфологию простейших в готовых окрашенных препаратах. Приготовить препарат «толстой капли» из крови.

Приготовление препарата «толстая капля»

На предметное стекло нанести две капли крови, которые равномерно распределить в виде пятна с 10 – копеечную монету. Нефиксированный препарат окрасить по Романовскому – Гимза.

Окраска по Романовскому – Гимза

Краска Романовского – Гимза состоит из азура, эозина и метиленового синего. Цитоплазма окрашивается в голубой­­ цвет, ядро – в красно – фиолетовый. Перед окраской 20 капель краски добавить к 10 мл дистиллированной воды и налить её на препарат на 30 – 40 минут, после чего краску слить, препарат промыть водой, высушить и микроскопировать.

4. Ознакомиться с морфологией спирохет в окрашенных по Романовскому – Гимза препаратах и в нативных препаратах при темнопольной микроскопии.

Техника темнопольной микроскопии

С помощью осветителя и его диафрагмы равномерно освещают зеркало микроскопа и вращением его добиваются появления на верхней линзе конденсора освещенного кольца. На поверхность конденсора наносят каплю дистиллированной воды, препарат «раздавленная капля» кладут на столик микроскопа и конденсор поднимают до соприкосновения с предметным стеклом. Устанавливают большой сухой объектив, находят объект, с помощью зеркала достигают максимальной освещенности поля зрения, после чего добиваются резкости изображения. На тёмном фоне видны спирохеты в виде тонких, блестящих, спиралевидно закрученных нитей.

5. Изучить морфологию риккетсий, хламидий, микоплазм в готовых препаратах.

Контрольные вопросы

1. Каковы основные различия в ультраструктуре клеток прокариотических и эукариотических микроорганизмов?

2. Чем характеризуются микоплазмы?

3. Как устроены клетки микроскопических грибов?

4. Какими способами размножаются грибы?

5. Чем отличаются низшие грибы от высших?

6. Каковы морфологические особенности простейших?

7. Какие микроорганизмы относят к переходным формам и чем они характеризуются?

8. Каковы особенности строения актиномицетов?

9. Какое строение имеют спирохеты?

10. Каковы отличительные особенности риккетсий и хламидий?

11. Какими методами изучаются грибы и актиномицеты?

12. Какие методы исследования применяют для выявления спирохет и простейших?



Сейчас читают про: