double arrow

Объем эритроцитов

Гематокритная величина, или показатель гематокрита, дает представление о соотношении между объемами плазмы и форменных элементах крови (главным образом эритроцитов), по­рученном после центрифугирования крови. Принятой гематокритной величиной выражать объем эритроцитов. В качестве унифицированных ме­тодов определения гематокритной величины (гематокрита) утверждены два метода: с помощью микроцентрифуги и микрометод в модификации Тодорова

3.3.1 Унифицированный метод с помощью микроцентрифуги.

Принцип. Центрифугирование крови определенное время при постоянном числе оборотов центрифуги с последующим определением результата по специальной шкале.

Реактивы. Антикоагулянты: гепарин — ЕД/мл разводят дистиллированной водой соотношении 1: 5 или этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевая соль (ЭДТА Na2, трилон Б), 40 г/л.

Оборудование. 1. Микроцентрифуга ШГ-8. 2. Капиллярные трубки (в комплекте

Ход определения. Предварительно обработанный антикоагулянтом и высушенный капилляр заполняют кровью из пальца (или венозной) на 7/в длины. Укупоривают капилляр с одного конца специальной пастой (можно пластилином). Помещают в ротор центрифуги, чтобы укупоренные концы упирались в резиновую прокладку, и центрифугируют 5 мин 8000 об/мин. По отсчетной шкале, приложенной к центрифуге МЦГ-8, определяют гематокритную величину.

3..3..2Унифицированный микрометод (модификации. Тодорова).

Принцип. Центрифугирование крови определенное время при постоянном числе оборотов центрифуги с после­дующим определением результата по градуиро­ванным капиллярам.

Реактивы те же.

Оборудование. 1. Центрифуга. 2. Пи­петки от аппарата Панченкова (с отрезанным верхним концом и длиной 10—11 см).

Ход определения. В обработанную антикоагулянтом и высохшую пипетку набирают кровь из пальца (или венозную) до верхней мет­ки (100 делений). Пипетку укупоривают, обтя­гивая ее резиновым кольцом, и центрифугируют 30—40 мин при 3000 об/мин. Результат отме­чают по градуировке капилляра, вычитая из 100 высоту столбика эритроцитов.

Нормальные величины. У здоро­вых гематокрит венозной и капиллярной крови равен 40—48 % (или 0,40—0,48) для мужчин и 36—42 % (или 0,36—0,42) для женщин.

Клиническое значение. Показа­тель широко используют для суждения о степени анемии, при которой, как правило, отмечается его снижение, иногда до значительных цифр (20—25 %). Выраженное повышение (55—65 %) характерно для эритремии, менее резкое увели­чение (50—55 %) наблюдается при симптома­тических эритроцитозах, сопутствующих вро­жденным порокам сердца, легочной недостаточ­ности, некоторым гемоглобинопатиям. Показа­тель гематокрита дает представление о гемокон-центрационных сдвигах, он снижается при гемодилюции. Используют гематокрит для расчетных показателей, отражающих различные характе­ристики эритроцитов: средний объем, средняя концентрация гемоглобина, а также для ряда биохимических показателей.

3.4 Осмотическая резистентность

Осмотическая резистентность (стойкость) - это устойчивость эритроцитов по отношению к гипотоническим растворам солей. В растворе с осмотическим давлением, равным осмотическому давлению крови, эритроциты не изменяются. Изотоническим раствором является раствор хлорида натрия в концентрации 0,85-0,9%. При перемещении эритроцитов в раствор с меньшей концентрации - гипотонический раствор, они набухают и гемолизируются. В гипертоническом растворе эритроциты сморщиваются, т. к вода из их выходит в раствор с большим осмотическим давлением. На этих свойствах эритроцитов основано определение их осмотической резистентности. Степень гемолиза их измеряется в гипотонических растворах хлорида натрия определенной концентрации.

3.4.1Унифицированный метод определения осмотической резистентности эритроцитов в модификации Идельсона

Принцип: Количественное определение степени гемолиза эритроцитов в за буферных гипотонических растворах хлорида натрия.

Реактив: основной раствор (27,31 г двузамещенного фосфата натрия Na;HPO<, 4,86 г однозамещенного фос­фата натрия NaH2P04-2H20, 180 г хлорида натрия в 2 л дистиллированной воды); РН раствора 7,4.

По своей осмотической концентрации основной ра­створ соответствует 10% раствору хлорида натрия. Его разводят в 10 раз, получая рабочий раствор, осмотическая концентрация которого соответствует 1% раствору хлори­да натрия. Из рабочего раствора готовят разведения хлорида натрия следующих концентраций: 0,85; 0,75; 0,70; 0,65: 0,60; 0,55; 0,50; 0,45; 0,40; 0,35; 0,30; 0,20 и 0,10%. Можно готовить сразу по 100 мл этих растворов и хранить течение 2 нед в холодильнике.

Ход определения. В 2 стерильные пробирки, со­держащие по 2 капли гепарина, берут по 1,5 мл крови. 1-ю пробирку помещают на сутки в термостат, 2-ю — используют в день взятия крови.

В 14 центрифужных пробирок разливают по 5,0 мл приготовленных растворов с последовательно понижа­вшейся концентрацией. В 1-ю пробирку помещают 5,0 мл рабочего раствора с концентрацией 1%. В каждую пробир­ку прибавляют по 0,02 мл гепаринизированной крови, перемешивают и оставляют на 30 мин при комнатной температуре (20° С). Центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость из каждой про­бирки сливают в чистую пробирку с соответствующим номером.

Фотометрируют на ФЭКе при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 10 мм против в холостой пробы.

Холостая проба – надосадочная жидкость в пробирке, содержащей 1 % раствор хлорида натрия.

Расчет. За 100% гемолиз принимают гемолиз в пробирке, содержащей 0,1 % раствор хлорида натрия. Вычисляют процент гемолиза в каждой пробирке, сравнивая величины экстинкции надосадочной жидкости с экстинкцией, при­нятой за 100 %, по формуле:

Ех х 100

Е1

где Е1) — экстинкция надосадочной жидкости в пробирке с 0,1 % раствором хлорида натрия; Ех — экстинкция исследуемой пробы; 100 — про­цент гемолиза в пробирке с 0,1 % раствором хло­рида натрия.

На следующий день повторяют исследование с кровью, инкубированной 24 ч при 37 °С.

Нормальные величины. У здоро­вых в свежей крови начало гемолиза отмечают при концентрации хлорида натрия 0,48—0,46%, а полный гемолиз — при 0,34—0,32% растворе хлорида натрия.

Клиническое значение. Исследо­вание проводят при подозрении на гемолити­ческую анемию. Понижение осмотической ре­зистентности, т. е. появление гемолиза эритроци­тов при более высокой, чем в норме, концентра­ции хлорида натрия (0,70—0,75 %), наблюда­ется при наследственном микросфероцитозе и некоторых наследственных несфероцитарных ге­молитических анемиях, а также иногда при ауто­иммунной гемолитической анемии. В ряде случа­ев понижение осмотической резистентности вы­является только при исследовании инкубирован­ной крови. Повышение осмотической резистент­ности характерно для талассемии.


Понравилась статья? Добавь ее в закладку (CTRL+D) и не забудь поделиться с друзьями:  



Сейчас читают про: