Общие принципы метода

1. Введение предшественника исследуемого макромолекулярного соединения, один из атомов которого заменен на радиоактивный изотоп. Так, например, у тимидина водород в 5 или 6 положении заменяют на тритий - образуется ³Н-тимидин (см. далее). При работе с культурами клеток радионуклиды вводят в питательную среду. В экспериментах на животных метку чаще всего вводят в кровь, хотя более эффективным может оказаться и местное введение.

2. В процессе жизнедеятельности клетки такое меченое соединение будет включаться в биополимер. Так ³Н-тимидин будет включаться в ДНК при ее синтезе. На этот процесс необходимо время (определенное для каждого типа клеток).

3. По истечении этого времени препарат фиксируют. Фиксатор не должен быть сильным окислителем. Кроме того, препарат обязательно необходимо обработать трихлоруксусной кислотой (ТХУ) для удаления немеченых предшественников нуклеотидов: ТХУ проводит легкий гидролиз нуклеотидов.

4. Далее, если проводится исследование ткани, то кусочки ткани обезвоживают и заливают по стандартным методикам. Из полученных форм готовят срезы и приклеивают их на стекла.

Если проводится радиоавтографическое исследование культуры клеток, то покровные стекла с выращенными на них клетками после фиксации 2-3 часа промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой, а затем 70% спиртом. Высушивают и оставляют в таком виде на ночь.

5. Следующий этап - покрытие фотоэмульсией. В это время в образце (ткань или культура клеток) идет распад изотопа: β-частицы летят в разных направлениях и попадают в зону фотослоя, активируя в нем зерна бромистого серебра. Покрытые фотоэмульсией препараты хранят в течение определенного срока (зависит от типа ткани) в темном месте.

5. Проявление препарата, в результате которого происходит восстановление серебра.

6. Фиксация для удаления галоидного серебра и атомов брома.