Агглютинация (от лат. agglutinacio-склеивание) - склеивание (соединение) антигеннесущих корпускулярных частиц молекулами специфических антител в присутствии электролитов, которое заканчивается образованием видимых невооруженным глазом хлопьев или осадка (агглютината). Различают реакцию агглютинации прямую -при которой во взаимодействие со специфическими антителами непосредственно участвуют собственные антигены бактериальной или другой клетки, например эритроцитов, и непрямую, или пассивную, при которой бактериальные клетки или эритроциты являются носителями не собственных, а сорбированных на них чужих антигенов(или антител) для выявления специфических к ним антител (или антигенов).Реакцию агглютинации ставят на стеклянных пластинках или пробирках. Для постановки реакции вносят в лунки (пробирки) вносят разведенную 0,85% -ным раствором NaCl сыворотку и равный объем суспензии стандартного диагностикума. Учет результатов реакции агглютинации проводят через 2 часа инкубации при 37 градусах. Оценку осуществляют по четырехкрестной системе. Реакция обязательно сопровождается контролем сыворотки и контролем антигена.
|
|
Классическая реакция агглютинации предусматривает использование корпускулярных антигенов. Однако в ней могут участвовать и растворимые антигены. Чтобы это стало возможным, такие антигены адсорбируют на иммунологически инертных частицах. В качестве носителя наиболее часто применяют в настоящее время эритроциты человека или животных. Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизированныными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют - реакцией непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА), так как эритроциты участвуют в ней пассивно.
РПГА ставится в специальных полистироловых пластинах с луночками с полусферическим дном. При использовании реакции для серологической диагностики готовят двукратные разведения в физрастворе исследуемой сыворотки и затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизируемых эритроцитов. Учет через 2 часа после инкубации при 37 град. по 4-х крестной системе. При положительной реакции агглютинировавшие эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, осадок выглядит в виде маленького "диска " в центре луночки. Титром сыворотки в РПГА является последнее ее разведение, которое дает еще ярко выраженную геммагглютинацию без значительных признаков наличия " диска".
РПГА может применяться также в качестве ускоренного метода диагностики для обнаружения в исследуемом материале неизвестных бактерий, вирусов. При таком варианте постановки в роли известного компонента реакции используют эритроциты адсорбировавшие известные по своей специфичности антитела- антительный эритроцитарный диагностикум. Если исследуемый материал содержит достаточное количество антиген, РПГА будет положительная.
|
|
Вариантами использования РПГА являются реакция нейтрализации антигена (РНАг), реакция нейтрализации антител (РНАт), реакция торможения пассивной геммагглютинации (РТПГА). Для этих реакций используют антигенные и антительные эритроцитарные диагностикумы.