2015-02-27
1190
| Ингредиент | Номер пробирки | ||||||
| Контроль антигена | Контроль сыворотки | ||||||
| Изотонический раствор натрия хлорида, мл | – | ||||||
| Сыворотка больного в разведении 1:50, мл | – | ||||||
| Полученное разведение сыворотки | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | 1:1600 | – | 1:50 |
| Взвесь бактерий, капли | – | ||||||
| Инкубация при температуре 37ºС в течение 2 ч, затем при комнатной температуре 18-20ч. |
В каждую пробирку с разведенной сывороткой вносят по 1-2 капли антигена (1-2 млрд. микроорганизмов в 1 мл), энергично встряхивают и помещают на 2 часа в термостат при температуре 37ºС, после чего предварительно учитывают результаты реакции, начиная с контролей (сыворотки и антигена). Отсутствие агглютинации в контрольных пробирках и наличие взвешенных хлопьев в опытных пробирках свидетельствуют о положительной реакции. Пробирки оставляют при комнатной температуре на 18-20 ч, после чего окончательно учитывают результаты. Интенсивность реакции выражается плюсами. При полной агглютинации (++++) жидкость совершенно прозрачная, а на дне пробирки осадок из хлопьев склеивающихся микроорганизмов. Чем меньше микроорганизмов агглютинировалось, тем мутнее жидкость и тем меньше хлопьевидный осадок на дне (+++, ++, +). При отрицательной реакции (–) осадка нет, взвесь остается равномерно мутной и по виду неотличима от содержимого пробирки с контролем антигена.
|
|
|
Применение РА для серологической диагностики инфекционных заболеваний – брюшного тифа и паратифов (реакция Видаля), сыпного тифа (реакция Вейгля), бруцеллеза (реакции Райта и Хаддлсона), туляремии и других заболеваний – основано на определении антител (агглютининов) в сыворотке больных.
Для проведения реакции берут у взрослого 3-5 мл крови из локтевой вены или пальца, мочки уха, а у маленьких детей 1 мл из пятки. Отделяют сыворотку крови и разводят изотоническим раствором натрия хлорида от 1:50 или 1:100 до 1:800 или 1:1600. Более низкие концентрации антител обычно не используют потому, что в крови могут находится нормальные антитела, которые способны в небольших разведениях вызывать реакцию агглютинации.
В качестве антигена в этой реакции используют диагностикумы – взвеси заведомо известных убитых и в отдельных случаях живых микроорганизмов. Диагностикумы из убитых организмов весьма устойчивы, не теряют своих свойств в течение нескольких лет и не представляют опасности заражения.
Техника проведения и учёт результатов РА с сывороткой больного не отличаются от таковых при развернутой реакции агглютинации для определения вида микроорганизмов.
