Культуральное исследование

Метод посева и выделения чистых культур возбудителей заболевания служит «золотым стандартом» микробиологической диагностики. Для посева материал берут из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, глотки и прямой кишки. Культуральное исследование наряду с микроскопией – основной метод при диагностике гонореи, трихомониаза, хламидиоза. Методы молекулярнобиологического исследования пока недостаточно специфичны для выявления этих возбудителей ИППП, чтобы вытеснить классические методы, но, несомненно, им принадлежит будущее (рис.1). Другая ситуация сложилась с оппортунистическими инфекциями половых путей, число которых в эру антибиотиков и урбанизации жизни общества неуклонно увеличивается, динамично меняется их этиологическая структура и чувствительность к антибиотикам. Частая антибиотикорезистентность этих микроорганизмов становится причиной неэффективности лечения, поэтому адекватный выбор рациональной этиотропной терапии в современных условиях признают постоянной клинической проблемой.

Известно, что возбудителями воспалительных процессов половых органов могут быть разнообразные УПМ, в норме входящие в состав транзиторного компонента индигенной (нормальной) микрофлоры. Их патогенные свойства проявляются лишь в определённых условиях нарушения иммунного гомеостаза макроорганизма и местной колонизационной резистентности. В этих условиях микробиологическая диагностика должна учитывать возможную этиологическую роль широкого круга патогенов, а не только какого-либо конкретного возбудителя, как при диагностике классических инфекционных заболеваний, вызываемых абсолютными патогенами. Задачей исследования становится не только идентификация микроорганизмов, обнаруженных в патологическом материале, но и обоснование их этиологической роли в воспалительном процессе. Поэтому при посеве клинического материала, особенно из локусов, и в норме имеющих микрофлору, очень важно использовать наиболее универсальные питательные среды, которые пригодны для культивирования широкого круга микроорганизмов. При этом необходимо учитывать количественные соотношения роста различных видов микроорганизмов в первичном посеве, так как истинному возбудителю чаще всего принадлежит превалирующая роль среди ассоциантов. Однако есть виды, которые и в небольшом количестве проявляют патогенные свойства (стрептококки групп А и В, протеи, клебсиеллы, золотистый стафилококк, листерии и др.).

Микробиологическая диагностика оппортунистических инфекций а базируется на интегральной оценке результатов микроскопического и культурального исследований. При этом строго анаэробный компонент оценивают по микроскопии граммазков – большое количество анаэробных морфотипов, выявляемых при световой микроскопии, свидетельствует об их этиологической роли. При этом определение чувствительности анаэробов к антибиотикам в настоящее время не имеет клинической целесообразности, так как в подавляющем большинстве они высокочувствительны к антибиотикам с антианаэробной активностью (клиндамицин, метронидазол).

Напротив, что касается факультативно-анаэробных и аэробных микроорганизмов, то диагностическая ценность микроскопического исследования отделяемого слизистых значительно снижается. Это связано, во-первых, с тем, что патогенные возможности этих бактерий могут проявляться при сравнительно небольшом (3 – 5 lg КОЕ/мл) их количестве, которое не выявляют при микроскопии. Во-вторых, даже если морфотипы факультативно-анаэробных бактерий обнаруживают в граммазках, морфологически они однотипны у многих видов и родов бактерий (это колиформные палочки или грамположительные кокки). В то же время их патогенные свойства и чувствительность к антибиотикам могут быть весьма разнообразными. Поэтому для характеристики факультативно-анаэробной части микроценоза, а также микроаэрофилов (в первую очередь лактобацилл), которые по морфологии могут быть сходными с многими видами облигатно-анаэробных бактерий (клостридии, эубактерии, пропионибактерии и др.), необходимо культуральное исследование – посев вагинального отделяемого. Для этих целей используют 5 % кровяной агар (наиболее универсальная среда для большинства УПМ), агар Сабуро (для выделения грибов), среду МРС (для культивирования лактобацилл).

Результаты культурального исследования дают возможность оценить видовой состав и количественное соотношение различных видов в ассоциации микроорганизмов, в том числе грибов, а также лактобацилл, и тем самым подтвердить принадлежность к роду лактобацилл тех лактоморфотипов, которые были обнаружены при микроскопии граммазков. Выделение из патологического материала и идентификация различных видов семейства Enterobacteriaceae, стафилококков, стрептококков, неферментирующих бактерий, нейссерий, коринебактерий, грибов и других микроорганизмов после количественной оценки их роста позволяет определить степень их этиологической значимости в развитии заболеваний у конкретного пациента.

Кроме того, в случаях когда диагноз кандидоза установлен при микроскопии грамотрицательного мазка, результаты посева могут выявить повышенные титры УПМ (грибы, энтерококки, колиформные и другие бактерии), которые могут стать причиной осложнений после этиотропной терапии препаратами с антианаэробной активностью. Особенно следует иметь в виду микроорганизмы, которые даже в низких концентрациях служат фактором повышенного риска для внутриутробного плода (листерии, стрептококки групп А и В).

Материалом для исследования служат выделения из мочеиспускательного канала, шейки матки, влагалища, глотки, прямой кишки. Метод характеризуется высокой точностью. Его называют «золотым стандартом», так как метод определяет небольшие концентрации возбудителей в материале пациента, определяет именно жизнеспособные микроорганизмы, позволяет определять чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Чувствительность и специфичность метода составляет 80 – 90 %.

Серьезным недостатком этого метода является то, что он занимает очень много времени (ряду микроорганизмов необходимо для роста несколько дней или даже недель).

Метод требует наличия качественных питательных сред, специальные условия культивирования для разных микроорганизмов. Некоторые микроорганизмы являются труднокультивируемыми или некультивируемыми, требуемые к питательным средам (это характерно для внутриклеточных и вирусных инфекций).