В зависимости от химического состава и строения клеточной стенки прокариоты делятся на грамположительные и грамотрицательные бактерии. Такое деление связано со способностью бактерии окрашиваться по Граму. Эта окраска является важным диагностическим признаком, она коррелирует со многими другими свойствами бактерий.
Основные отличия в строении клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий схематически изображены на рисунке 3.
Рис.3:Схематическое изображение клеточной стенки грамположительных (А) и грамотрицательных (Б) бактерий: 1-цитоплазматическая мембрана, 2-пептидогликан, 3-переплазпатическое пространство, 4-наружная мембрана, 5-ДНК.
Сущность окраски по Граму заключается в том, что при обработке клеток прокариот сначала красителем генциановым фиолетовым, а затем йодом, образуется окрашенный комплекс, который при последующей обработке спиртом удерживается грамположительные, вымываются из клеток грамотрицательные бактерии, которые в результате обесцвечиваются. При последующей обработке фукцином они приобретают розово-красную окраску, а грамположительные имею сине-фиолетовую окраску.
|
|
Рис.4: Однослойная структура пептидогликана. Линиями обозначены гетерополимерные цепочки, образованные чередующимися остатками N-ацетилглюкозамина (Г) и N-ацетилмурамовой кислоты (М), соединенными между собой β-1,4-гликозидными связями. Кружочками обозначены аминокислоты пептидного хвоста.
Приготовление препаратов бактерии, окрашенных по Граму.
1. Приготовление мазка.
2. Фиксация препарата.
3. Окрашивание препарата генциановым фиолетовым (1-2 мин).
4. Обработка раствором Люголя до почернения.
5. Обработка 96% этиловым спиртом (0,5 – 1 мин).
6. Промывание препарата водой.
7. Окрашивание фуксином (1-2 мин).
8. Промывание препарата водой.
9. Высушивание водой.
10. Микроскопирование препарата с иммерсионной системой.
При правильном окрашивании грамположительные окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, а грамотрицательные – красный.