Из клеток эукариот выделены три типа РНК-полимераз, каждая из которых ответственна за транскрипцию различных групп генов. Эти ферменты названы РНК-полимераза I, РНК-полимераза II и РНК-полимераза III (Pol I,II,III). Полимеразы структурно сходны друг с другом. Молекулярная масса около 500 кД. В их состав может входить до 10 полипептидных цепей, причем некоторые из них одинаковы у разных полимераз, однако есть и уникальные, характерные для каждой полимеразы субъединицы. РНК-полимеразы эукариот и бактерий эволюционно родственны.
Pol I рРНК
Pol II все иРНК, U1, U2, U4, U5 snRNA
Pol III 5S РНК, тРНК, U6 snRNA и другие маленькие РНК
Как видно, только одна из полимераз, РНК-полимераза II, участвует в синтезе и-РНК, которая затем используется для синтеза белков. Кроме того эта же полимераза участвует в образовании большинства малых РНК, которые образуют snRNP. Что касается остальных полимераз, то РНК-полимераза I синтезирует высокомолекулярную рибосомную РНК, а РНК-полимераза III - разнообразные низкомолекулярные стабильные РНК, в том числе тРНК и рибосомную 5S-РНК. РНК-полимеразы эукариот нечувствительны к ингибиторам бактериальных РНК-полимераз - рифампицину и стрептолидигину. Специфическим ингибитором РНК-полимеразы II является токсин бледной поганки - a-аманитин, использование которого помогло в открытии разных РНК полимераз: РНК-полимераза I не чувствительна к нему; РНК-полимераза II обладает очень высокой чувствительностью; РНК-полимераза III ингибируется только под действием высоких доз этого токсина. Механизм синтеза РНК во многом напоминает синтез ДНК
|
|
Об участии в синтезе белков РНК известно с 40-х годов ХХ столетия, но роль и-РНК как молекулы посредника стала известна в 1961 году благодаря работам французских биохимиков Ф.Жакоба и Ж. Моно. В начале 60-х открывается и фермент, катализирующий синтез РНК – РНК-полимераза. В целом, механизм синтеза РНК по многим свойствам напоминает синтез ДНК. Для работы РНК-полимеразы необходимы:
- Матрица. Роль матрицы, как правило, выполняет двуцепочечная ДНК.
- Субстраты. Необходимы все четыре рибонуклеозид трифосфата АТФ, ГТФ, ЦТФ и УТФ.
- Ионы двухвалентных металлов. Обычно это ионы Mg2+.
Схема синтеза РНК может выглядеть следующим образом:
аАТФ+bГТФ+cЦТФ+dУТФ à РНК + (a+b+c+d) пирофосфат.
Синтез молекулы РНК идет в направлении 5’à 3’ с перемещением фермента по матрице в направлении 3’à 5’. Механизм соединения нуклеотидов под влиянием РНК-полимеразы подобен синтезу ДНК и заключается в нуклеофильной атаке внутреннего фосфата очередного рНТФ 3’-ОН группой на конце растущей цепи. Необратимость реакции связана с гидролизом пирофосфата, высвобождаемого в реакции синтеза РНК.
|
|
Однако существует и ряд особенностей в синтезе РНК. РНК-полимераза не нуждается в затравочном олигонуклеотиде (праймере), не обладает нуклеазной активностью, перемещается значительно медленнее по матрице (приблизительно 50-100 оснований/сек для РНК против около 1000 осн/сек для ДНК). Точек инициации транскрипция намного больше чем у репликации. Число молекул РНКполимераз в клетке намного больше, чем ДНК-полимераз. Наконец, точность полимеризации РНК - намного ниже, чем ДНК. Это допустимо, так как дефектные молекулы РНК могут быть просто удалены и взамен синтезированы новые «правильные» молекулы.