2015-01-07
927
Для проявления максимальной каталитической активности ферментов требуются определенные условия, в том числе оптимальная концентрация водородных ионов. Каждый фермент наиболее активен в пределах довольно узкой зоны рН, называемой оптимум рН. Активность ферментов уменьшается, если рН меняется в любую сторону от оптимального значения. Отклонение рН от оптимума влияет на степень ионизации фермента и субстрата, может нарушить связь между белковой частью фермента и их простетическими группами, может влиять на связывание субстрата с ферментами.
Оптимальное значение рН для некоторых ферментов
| Фермент | рН |
| Пепсин | 1,5-2,5 |
| Трипсин | 8,0-9,0 |
| Сахараза кишечная | 6,2 |
| Амилаза слюны | 6,9-7,0 |
| Липаза желудочного сока | 6,0 |
| Липаза панкреатическая | 7,0-8,5 |
| Каталаза | 7,0 |
Порядок выполнения работ
В 7 предварительно пронумерованных пробирок наливают 0,2 м раствор двузамещенного фосфорнокислого натрия и 0,1 м раствор лимонной кислоты в соотношениях, указанных в таблице. Получают буферные растворы с рН от 5,6 до 8,0. В каждую пробирку добавляют по 10 капель 1% раствора крахмала, по 10 капель слюны, разведенной в 100 раз. Перемешивают содержимое пробирок и помещают их в водяную баню или термостат при температуре 38о на 5-10 минут (в зависимости от индивидуальных особенностей активности слюны).
Влияние рН среды на активность амилазы
| № п/п | Кол-во 0,2 м р-ра Na2HPO4, мл | Кол-во р-ра лимонной к-ты, мл | рН смеси | Кол-во 0,5% р-ра крахмала на 1% р-р NaCl | Кол-во разведенной слюны(1:100), мл | Окрашивание с йодом |
| 1. | 0,58 | 0,42 | 5,6 | по 10 капель | по 10 капель | |
| 2. | 0,63 | 0,37 | 6,0 | |||
| 3. | 0,69 | 0,31 | 6,4 | |||
| 4. | 0,77 | 0,23 | 6,8 | |||
| 5. | 0,87 | 0,13 | 7,2 | |||
| 6. | 0,94 | 0,06 | 7,6 | |||
| 7. | 0,97 | 0,03 | 8,0 |
Затем во все пробирки добавляют по 1 капле раствора йода в йодистом калии, перемешивают, наблюдают окраску и определяют рН, при котором амилаза действует наиболее активно. В зависимости от активности слюны ее можно разводить не в 100, а в 50 или 10 раз.
Эталоны ответов к тестовым заданиям
Вид 1. 1.1.-в; 1.2. –б; 1.3. –а;
Вид 2. 2.1.-В; 2-А; 3-Д; 4-Б; 5-Е; 6-Г;
2.2.-Г; 2-Б, В, Д; 3-Г; 4-Г; 5-Б; 6-Е; 7-Б.
Вид 3. 3.1. – 2,4; 3.2. -1,2,3,4,5.
Вид 4. 4.1.- Д (-, +, -); 4.2.-Д (-, +, -).
