Техника окраски по Граму

· карболовый генциан-виолет – 1 - 2 мин. (на полоски фильтровальной бумаги, пропитанные раствором генциан-виолета и высушенные, наносят несколько капель воды);

· краску сливают, не промывая водой, наносят раствор Люголя на 1 мин. При этом мазок чернеет;

· раствор Люголя сливают, обрабатывают препарат спиртом в течение 30 сек., слегка покачивая мазок (до прекращения отхождения лиловых струек);

· немедленно промывают мазок водой;

· докрашивают препарат водным фуксином в течение 1 - 2 мин;

· мазок промывают, высушивают, микроскопируют.

Способность бактерий различно окрашиваться по методу Грама, обусловлена различиями структуры и химического состава бактериальной клетки, прежде всего, оболочки. В зависимости от результатов окраски все микроорганизмы делят на две группы — грамположительные и грамотрицательные.

Грамположительные (Bacillus cereus, Staphylococcus aureus и др.) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, т.к. их оболочечные структуры связывают и прочно удерживают комплекс генциан-виолета с йодом, не обесцвечивающийся спиртом. Грамотрицательные бактерии (Escherichia coli) окрашиваются в светло-красный цвет, поскольку их оболочка неспособна формировать и удерживать комплекс генциан-виолета с йодом, легко обесцвечиваясь спиртом (рис. 12).

При окраске бактерий по методу Грама необходимо учитывать следующие обстоятельства:

· возраст культуры имеет существенное значение, так как в "старых" культурах тинкториальные свойства бактерий могут быть изменены;

· мазок должен быть тонким и равномерным;

· не рекомендуется подвергать препарат форсированной горячей сушке;

· окрашивать можно лишь полностью остывший препарат.

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ

Тема 3. МОРФОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. КАПСУЛЫ, СПОРЫ, ЖГУТИКИ БАКТЕРИЙ

Перечень конкретных учебно-целевых вопросов

1. Жгутики и пили. Их структура и функции. Способы изучения подвижности бактерий. Методы окраски жгутиков.
2. Капсула бактерий, ее функции и особенности химического состава, методы выявления.
3. Кислотоустойчивые бактерии и способы их окраски.
4. Споры и спорогенез у бактерий. Ультраструктура спор, особенности их химического состава, функции. Методы окраски спор.