Метод флюоресцирующих антител (МФА)

Данный метод является экспрессным и высокочувствительным. Существуют две его разновидности.

При прямом методе к исследуемой взвеси микробов, фиксированной на стекле, добавляют сыворотку, меченную флуорохромом (для этой цели используют обычно изотиоцианат флуоресцеина - ФИТЦ). Образующийся комплекс антиген - антитело при освещении ультрафиолетовыми (сине-фиолетовыми) лучами дает ярко-зеленое свечение.

При непрямом методе МФА используют обычные диагностические сыворотки против какого-либо вида микробов. Добавление этой сыворотки к испытуемой взвеси микробов вызывает образование комплекса антиген - антитело. Этот комплекс выявляется при помощи универсальной флюоресцирующей сыворотки, содержащей антитела к глобулиновой фракции крови того вида животного от которого была получена диагностическая сыворотка.

Для образования комплекса антиген - антитело препарат помещают во влажную камеру при 37°С, затем тщательно промывают дистиллированной или водопроводной водой от несвязавшихся антител. Светящийся комплекс выявляют при люминесцентной микроскопии.

Люминесцентная микроскопия позволяет не только удостоверить наличие микроорганизма и оценить его морфологию, но и выяснить, в каких клеточных структурах микроорганизм локализован, что чрезвычайно важно для клинической диагностики.

Непрямой МФА можно использовать и для выявления антител в сыворотке крови. Для этого на стекло наносят взвесь эталонного микроорганизма, после фиксации его на стекле и промывания наносят капли сыворотки крови в определенных разведениях. После промывки наслаивают люминесцирующую сыворотку против глобулиновой фракции сывороточных белков крови человека.

В последние годы в качестве флюоресцентной метки используют положительно заряженные ионы редкоземельных металлов - лантанидов (европий, самарий, тербий и др.), которые обладают гораздо более длительной флюоресценцией и большим стоксовским сдвигом. Все это позволяет снизить количество ложноположительных результатов.