2015-05-12
1575
| Тема: | Количественный анализ каталитической активности ферментов. Анализ амилолитической активности амилазы слюны |
| Цель работы: | - Ознакомление студентов с принципами выражения каталити-ческой активности ферментов: единицы активности ферментов - Определение каталитической активности амилазы - Изучение влияния физических и химических факторов на активность ферментов |
Оборудование и материалы:
· Спектрофотометр SOLAR
· Кюветы стеклянные
· Термостат
· Плитка электрическая
· Пробирки
· Штативы для пробирок
· Колбы на 100-250мл
· Стакан на 300 мл
· Автоматические микропипетки
· палочки стеклянные
Реактивы:
· Крахмал, 0.25% раствор
· Сахароза, 2% раствор
· Фосфатно-цитратные буфера: рН 4.0, рН 5.4, рН 6.8, рН 8.0
· Фосфатный буфер, рН 6.8
· Гидроксид натрия (NaOH), 10% раствор
· Сульфат меди (CuSO4), 1% раствор
· Раствор Люголя (1% раствор йода в 2,5% растворе KJ)
· Вода дистиллированная
Теоретическая часть
Механизм действия ферментов
Размеры ферментов намного превышают размеры их низкомолекулярных субстратов. В связи с этим возникло представление о том, что в катализе участвует небольшая область молекулы белка. Эта область получила название каталитического центра. На начальных этапах изучения ферментов было непонятно, чем объясняются большие размеры этих макромолекул, если только часть их структуры имеет отношение к связыванию субстрата и катализу. Как показал последующий анализ трехмерной структуры фермент-субстратных комплексов, в связывании субстрата участвует заметно бόльшая часть белковой молекулы, чем предполагалось ранее. Кроме того, если учесть, что в работу многих ферментов включаются регуляторные (аллостерические) центры, имеющие размеры, сравнимые с размерами активных центров - не приходится удивляться объемности молекул ферментов.
|
|
|
Модели фермент-субстратного взаимодействия
