Вирусологические исследования

Полиовирусы (1—3-й), большинство вирусов Коксаки В, ECHO, некоторые типы вирусов Коксаки А (7-й, 9-й, 14-й, 16-й, 21-й) при размножении в культуре клеток по­чек обезьян оказывают ЦПД. В культуре клеток почек эмбриона человека, амниона человека, диплоидных клет­ках WI-38 репродуцируются вирусы Коксаки А (11-й, 13-й, 15-й, 18-й, 20-й, 21-й, 24-й), ECHO (21-й, 34-й). Боль­шинство серотипов Коксаки А размножаются и вызыва­ют ЦПД в культуре клеток RD (культура из рабдомиосаркомы человека). Для выделения вирусов Коксаки параллельно с культурами клеток заражают новорож­денных мышей.

Вирусы Коксаки А из материала от больных наиболее успешно удается выделить только на однодневных мы­шах-сосунках, так как они не размножаются в большин­стве культур клеток обезьян и человека.

Мышей-сосунков заражают в мозг (0,01 мл), под­кожно (0,03 мл), внутрибрюшинно (0,05 мл) или ком­бинированным методом,. За инокулированными живот­ными наблюдают 14 дней. При развитии клинических симптомов из мозга больных животных и тушек готовят 20 % суспензию для дальнейшего пассирования вируса. Берут также кусочки тканей для гистологического иссле­дования.

Индикацию энтеровирусов проводят по ЦПД и бляшкообразованию под агаровым или бентонитовым покрытиями, в культуре клеток, развитию пара­личей у мышей-сосунков и их гибели, а также по физи­ко-химическим свойствам: небольшие размеры, резистент-ность к жирорастворителям и низким значениям рН (3,0), термостабильность при температуре 50 °С в при­сутствии 1 М MgCl₂ (магния хлорида).

Для идентификации энтеровирусов применяют РН, РТГА, РСК, РПГ, РИФ с типоспецифическими иммун­ными сыворотками.

РН проводят в культуре клеток или на мышах-сосун­ках по общепринятой методике.

Идентификацию штаммов вирусов Коксаки А. В и ECHO, обладающих гемагглютинирующими свойствами, осуществляют с помощью РТГА с использованием анти­генов из зараженных клеточных культур и 1 % взвеси эритроцитов человека группы 0(І).

Для РСК вместо антисывороток применяют иммун­ную асцитическую жидкость мышей, обладающую мень­шей антикомплементарностью.

РПГ дает хорошие результаты с антигеном, концент­рированным в 200—400 раз.

Для концентрации энтеровирусов применяется бентонитовый ме­тод. К 500 мл культуральной вируссодержащей жидкости добав­ляют 0,05—0,1 % геля бентонита по сухому весу сорбента, рН сме­си доводят до 3,5—4,0 0,1 N раствором НС1. Смесь встряхивают 3—5 мин, центрифугируют при 2000—3000 об/мин в течение 10— 15 мин. Осадок (вирус-бентонит) отмывают 20—40 мл дистиллиро­ванной воды. Элюцию вируса осуществляют 0,05 М раствором трис-буфера (рН 9,0) при интенсивном встряхивании в течение 4— 5 мин. После этого смесь центрифугируют и исследуют надосадочную жидкость, в которой находится вирус. Этот метод позволяет сконцентрировать вирус в 100—200 раз.

Для серологической диагностики

применяют РН, РСК, РТГА. Диагностическое значение имеет 4-кратное и более увеличение титра антител. Результаты сероло­гического исследования необходимо сопоставить с виру­сологическими, эпидемиологическими и клиническими данными.

Для проведения РН смешивают 100 доз вируса с 2-кратными разведенными сыворотками больного. При проведении РН в культурах клеток результаты учиты­вают на 3—4-й и 7—8-й день, на мышах-сосунках — на 10—14-й день.

РСК используют для диагностики полиомиелита. Диагностическое значение имеет выявление антител в титре 1: 32 и выше, а также увеличение титра антител в 4 раза и более. Лучшие результаты дают непрогретые (малореактивные) антигены, полученные путем одно­кратного замораживания и оттаивания инфицированных клеток после наступления полной специфической дест­рукции.

РТГА для серологической диагностики энтеровирусных инфекций применяется редко. Гемагглютинирующий антиген получают при высоком титре вируса (10⁶ — 10⁷ ЦПД₅₀/МЛ). Сыворотки больных обрабатывают для удаления спонтанных гемагглютининов и неспецифиче­ских ингибиторов гемагглютинации.

Описано применение РИФ для исследова­ния клеток спинномозговой жидкости. При ротавирусных инфекциях применяют ЭМ и ИЭМ (см. с. 243).

.