СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ.
Цель: уметь выявлять различные структуры бактериальной клетки.
Освоить технику окраски сложными методами: Грама,
Гинса-Бурри, Нейссера, Циля-Нильсена, Ожешко.
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ:
1. Основные отличия прокариотических и эукариотических клеток.
2. Структура и химический состав бактериальной клетки.
3. Постоянные и непостоянные структуры бактерий и методы их
выявления.
4. Особенности строения Грам (+) и Грам (-) бактерий.
5. Сложные методы окраски, сущность каждого метода.
6. Методы определения подвижности микробов.
САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА:
1. Записать отличия прокариот и эукариот.
2. Изучить и записать технику окраски по методу Грама Приготовить мазок из смеси двух культур бактерий, окрасить методом Грама. Изучить под микроскопом. Определить форму микробов и их отношение к окраске по Граму. Зарисовать
3. Изучить и записать технику окраски микропрепаратов сложными методами: 1/Нейсера, 2/Циля-Нильсена, 3/Ожешко, 4/Бурри-Гинса.
Промикроскопировать и зарисовать готовые микропрепараты в
|
|
окраске этими методами.
4. Изучить и записать методы определения подвижности микробов. Провести темнопольную микроскопию мазка «раздавленная капля». Описать принцип микроскопии.
5. Уборка рабочего места.
6. Отчет преподавателю по протоколу.
Работа №1: Отличия прокариот и эукариот:
Признак | Прокариоты | Эукариоты |
Генетический материал | ||
Ядерная мембрана | ||
Гистоны | ||
Набор хромосом | ||
Аппарат Гольджи, митохондрии, хлоропласты | ||
Клеточная стенка | ||
Размеры клеток | ||
Тканевая дифференциация |
Работа №2: Сложные методы окраски бактерий.Метод Грама.
Для выявления определенных структур бактерий применяют сложные методы окраски, в основе которых лежит учет химических особенностей этих структур и использование контрастных красителей.
Метод Грама позволяет выявить особенности строения клеточной стенки бактерий.
1. Генцианвиолет (бумажки по Синеву) смочить водой _____мин.
2. Раствор Люголя –_______ мин.
3. Этиловый спирт –________________
4. Промывание водой
5. Фуксин Пфейффера – ____ мин.
6. Промыть водой.
При этом методе окраски одни бактерии не обесцвечиваются спиртом и сохраняют окраску_____________ красителя, вторые обесцвечиваются спиртом и окрашиваются _____________ красителем.
В зависимости от строения клеточной стенки все микроорганизмы подразделяются на Грам (+) и Грам (-). Способность Грам (+) бактерий удерживать генцианвиолет в комплексе с йодом связана со свойством многослойного пептидогликана взаимодействовать с краской.
|
|
Особенности строения клеточной стенки Грам (+)и Грам (-) бактерий.
Признак | Грам (+) | Грам (-) |
Толщина КС | ||
Пептидогликан | ||
% ПГ от КС | ||
Тейхоевые кислоты | ||
Липиды | ||
Белки-порины |
Грам (+) бактерии окрашиваются в _____________________цвет, потому, что__________________________________________________
____________________________________________________________.
Грам (-) бактерии окрашиваются в ____________________цвет,
потому, что __________________________________________________
____________________________________________________________.
Грам (+)_____________________