Окраска по Цилю-Нильсену

Сложный способ окраски, дифференцирующий бактерии на кислотоустойчивые и некислотоустойчивые.

1. На фиксированный мазок нанести карболовый фуксин Циля через полоску фильтровальной бумаги и подогреть до появления паров в теч. 3-5 минут.

2. Снять бумагу, промыть препарат водой.

3. Нанести 5% раствор серной кислоты или 3% раствор смеси 96° этилового спирта с хлороводородной кислотой на 1-2 мин. Для обесцвечивания.

4. Промыть водой

5. Докрасить препарат водным раствором метиленового синего в теч. 3-5 мин.

6. Промыть водой. Высушить.

Микроскопия иммерсионная. Видим кислотоустойчивые бактерии окрашены в красный цвет, некислотоустойчивые в голубой цвет. Данный способ окраски применяют для обнаружения возбудителя туберкулеза в исследуемом материале.

Определение подвижности микроорганизмов

Метод «раздавленной» капли.

На поверхность обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают её покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей за край покровного стекла. Микроскопируют препарат под объективом 40, без иммерсионного масла, конденсор опущен. Вначале под объективом 8 находим край капли, а затем устанавливаем объектив 40 и исследуем препарат.

Метод «висячей» капли.

Препарат готовят на покровном стекле, в центре которого наносят каплю бактериальной культуры. Затем покровное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Под объективом 8 находим край капли, а затем устанавливают объектив 40 и исследуют препарат без иммерсионного масла, при опущенном конденсоре.

Прижизненная (витальная) окраска

Взвесь микроорганизмов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного (можно тушь, разведенную 1:10). Затем готовят препарат «висячей» или «раздавленной» капли. Микроскопию проводят при объективе 40, без иммерсионного масла, при опущенном конденсоре. После микроскопии препараты поместить в дез. раствор.