Реакция преципитации

В основе реакций преципитации лежит образование и выпадение в осадок комплексов антиген-антитело. В реакции участвуют растворимые антигены: преципитиногены (продукты микроорганизмов, тканей, химические вещества и лекарства). Антитела (преципитины), соединяясь с растворимыми антигенами, вызывают их агрегацию, что проявляется в помутнении прозрачных жидкостей или выпадении осадка (преципитата). Диагностические преципитирующие сыворотки выпускают с высоким титром антител. Их получают путем иммунизации лабораторных животных соответствующим антигеном. Титром преципитирующей сыворотки является минимальное количество антигена, которое данная сыворотка может преципитировать.

Реакцию преципитации можно проводить в жидкой и плотной среде (в агаре или геле).

Реакция преципитации в жидкой среде (кольцепреципитация). Реакцию ставят в узких пробирках, куда вносят преципитирующую антисыворотку, а сверху осторожно наслаивают прозрачный раствор антигена. При положительной реакции через несколько минут на границе соприкосновения двух жидкостей появится кольцо преципитации. При малых количествах реагентов реакцию можно проводить в капиллярах (микропреципитация).

Реакция преципитации в агаре. Сущность реакции в том, что антигены и антитела, помещенные в разные лунки в агаре, диффундируют навстречу друг другу и при взаимодействии образуют комплекс, который осаждается в виде линии преципитации.

Двойная радиальная иммунодиффузия по Оухтерлони. Реакцию проводят на пластинках с агаровым гелем. Растворы антигена и антисыворотки помещают в лунки, вырезанные на некотором расстоянии друг от друга. Иммунореагенты диффундируют в геле, при встрече образуют комплексы, которые осаждаются в виде линий преципитации. Этот метод позволяет исследовать сразу несколько образцов иммунореагентов. Например, вокруг лунки с антисывороткой можно разместить несколько лунок с растворами разных антигенов или наоборот.

Метод определения токсигенности микробов в реакции преципитации. Принцип иммунодиффузии в геле положен в основу метода, который применяется для изучения токсигенности (способности вырабатывать токсин) бактерий. Например, для обнаружения дифтерийного токсина на чашку Петри с агаром посередине накладывают полоску фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической сывороткой. Рядом засевают исследуемые культуры бактерий. Если они выделяют токсин, то при взаимодействии с антитоксинами между колониями и полоской бумаги образуются линии преципитации.

Иммунодиффузия в геле лежит в основе реакции преципитации по Манчини, которая используется для определения классов иммуноглобулинов в сыворотке крови

Реакции преципитации используются для; определения антигенов бактерий, тканей человека и животных; диагностики некоторых инфекционных заболеваний; определения видовой принадлежности белка в судебной медицине; выявления примесей в мясных, рыбных, мучных изделиях в санитарной практике.

49 реакция антиген-антитело.

Сущность реакции заключается в том, что комплемент, добавленный к специфическому комплексу антиген — антитело, связывается последним. Если отсутствует специфическое сродство между антигеном и сывороткой, то образования комплекса не произойдет и комплемент будет свободный, несвязанный. Связывание комплемента устанавливают по результатам, полученным от добавления гемолитической системы (гемолитическая сыворотка — J- эритроциты барана) к системе антиген — антитело. Если комплемент был связанный с антигеном и сывороткой, то литическая функция его не выявляется и эритроциты осядут на дно пробирки (положительная реакция). Если комплемент не был связанный, то он обусловит гемолиз сенсибилизированных эритроцитов (отрицательная реакция). Таким образом, без комплемента каждая из этих двух иммунологических реакций не может произойти, но в гемолитической системе оба компонента известны, и достаточно добавить комплемент, чтобы произошла реакция. В системе антиген + антитело один неизвестный компонент определяется другим известным, если этот комплекс свяжет комплемент. Отсюда вытекает практическое значение реакции, которая дает возможность по взаимодействию известного антигена с антителом определить свойства неизвестной сыворотки, установить наличие в ней комплементсвязывающих антител и определить природу неизвестного антигена с помощью известной специфической сыворотки, приготовленной на животных, или сыворотки реконвалесцентов.