Методы посева и культивирования микроорганизмов

Подготовка к анализу

1. Степень разведения навески продукта.

1.1. Степень разведения навески продукта для посева на плотные среды выбирают так, чтобы общее количество колоний, выросших нa чашке Петри, колебалось в пределах 15—300; количество колоний специфических групп бактерий (например, колиформных) – 15-150; плесеней 5-50.

1.2. Степень разведения навески продукта для посева в жидкие среды выбирают так, чтобы хотя бы в одной пробирке наибольшего разведения отсутствовали микроорганизмы.

Количество продукта, которое необходимо профильтровать для получения изолированных колоний на фильтре, должно быть указано в нормативно-технической документации на методы анализа соответствующих групп, свойств, родов или видов микроорганизмов.

2. Объем навески продукта или его разведения для посева.

2.1. При посеве глубинным методом 1 см³ жидкого продукта или разведения навески продукта смешивают с расплавленной питательной средой.

2.2. При посеве поверхностным методом 0,1 или 0,2 см³ жидкого продукта или разведения навески продукта вносят на поверхность плотной среды.

2.3. Для выявления присутствия (отсутствия) микроорганизмов и определения их таксономических свойств в жидкие среды вносят до 50 г (см³) продукта; при определении количества микроорганизмов в жидкие среды вносят до 100 см³ жидкого продукта или разведения навески.

Проведение анализа

Глубинный метод посева в плотные среды

1.1. Жидкий продукт или разведение навески вносят параллельно в две чашки Петри и заливают не позднее чем через 15 мин расплавленной и охлажденной до температуры 45±1^оС питательной средой. Высота слоя питательной среды должна быть 4-5 мм.

1.2. Среду немедленно равномерно перемешивают с посевным материалом круговыми движениями чашки так, чтобы среда не вытекла из чашки и не загрязняла крышку. После застывания среды чашки с посевами вверх дном помещают в термостат.

Поверхностный метод посева на плотные среды

2.1.Среду наливают в чашку Петри и после застывания подсушивают. При подсушивании для удаления влаги с поверхности среды чашки открывают, переворачивают вверх дном и выдерживают в течение 30 мин при 48-50^оC или в ламинарном боксе 1-2 ч, или в других условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги и исключающих микробное загрязнение.

2.2.На подсушенную среду наносят жидкий продукт или разведение навески и немедленно равномерно растирают по поверхности шпателем – изогнутой стеклянной палочкой.

2.3.Засеянную поверхность подсушивают, выдерживая чашки в горизонтальном положении в течение 15 мин.