Количественное определение

Количественное определение карбоксигемоглобина (НЬ • СО) в крови основано на том, что как оксигемоглобин (НЬ • О₂), так и метгемоглобин могут быть восстановлены дитионитом натрия, а НЬ • СО с этим реагентом не взаимодействует.

Для определения необходимы водный раствор аммиака (1 мл/л); твердый дитионит натрия Na₂S₂O₄ • 2Н₂О (хранится в эксикаторе); баллон с чистым газообразным СО или смесью СО и азота; баллон с газообразным кислородом или сжатым воздухом. Возможно получение СО взаимодействием концентрированных серной и муравьиной кислот.

Для определения 0,2 мл крови добавляют к 25 мл раствора аммиака и тщательно перемешивают. Пробу делят на 3 примерно равные порции А, В и С.

Порцию А хранят в закупоренной пробирке. Порцию крови В насыщают оксидом углерода до полного замещения кислорода на СО (т.е. для получения 100% НЬ • СО), продувая газ через раствор в течение 5 - 10 мин. Порцию С насыщают кислородом, продувая чистый кислород или сжатый воздух через раствор в течение 10 мин для полного замещения СО на кислород (0% НЬ • СО). К каждому раствору (А, В, С) добавляют небольшое количество (около 20 мг) Na₂S₂O₄ • 2Н₂О и 10 мл раствора аммиака и перемешивают. Снимают спектр в видимой области или измеряют поглощение при 540 и 579 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор дитионита натрия в водном растворе аммиака.

Долю насыщения карбоксигемоглобином можно рассчитать по следующей формуле: HbCO (%) = { (А₅₄₀/A₅₇₉ раствор А) - (А₅₄₀/А₅₇₉ раствор С) * 100%}/ { (A₅₄₀/ A₅₇₉раствор В) - (А₅₄₀/А₅₇₉ раствор С) }, принимая во внимание, что (А_540/А₅₇₉ раствор В) = 1,5, что соответствует 100% НЬСО, (А₅₄₀/А₅₇₉ раствор С) = 1,1, что соответствует 0% НЬСО.

Измерения проводят в области максимальной разности между поглощением НЬ • СО [λ _{max (}Hb*CO) =540 нм] и точке равного поглощения НЬ • СО и НЬ • О₂ (579 нм, изобестическая точка).

Присутствие на спектре раствора А двух почти симметричных пиков ("кроличьи уши") - характерный признак отравления угарным газом.