Работа 1. Определение количества гемоглобина

Гемоглобин является главной составной частью эритроцитов. Это сложный хромопротеид, состоящий из белка глобина и пигмента гема, от которого зависит цвет крови. В состав гема входит один атом двух валентного железа, который обуславливает способность гемоглобина вступать в соединение с кислородом.

Содержание гемоглобина в крови у здоровых женщин составляет 120-140 г/л, а у мужчин - 130-160 г/л.

Определение содержания гемоглобина в крови производится калориметрическими способами, один из которых (гематиновый метод Сали) основан на образовании устойчивого раствора коричневого цвета при взаимодействии гемоглобина с хлористоводородной кислотой.

Гемометр Сали представляет собой штатив, задняя стенка которого сделана из белого матового стекла. В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Две крайние пробирки запаяны и содержат стандартный раствор гематина; средняя градуирована. Она предназначена для проведения исследований. К прибору прилагается пипетка с меткой 20 мм и стеклянная палочка. Стандартный раствор хлорида гематина соответствует 167 г/л гемоглобина.

Для работы необходимо: гемометр Сали, пипетка, скарификатор, вата, 0,1н раствор HCl, спирт, эфир, йод, дистиллированная вода. Работа проводится на человеке.

Ход работы. В среднюю пробирку гемометра наливают 0,1н раствор HCl до нижней метки. Пипеткой берут 20 мкл крови из пальца и, обтерев кончик ее ватой, тотчас выдувают кровь на дно пробирки так, чтобы верхний слой кислоты оставался неокрашенным. Не вынимая пипетку споласкивают ее кислотой. После этого содержимое пробирки перемешивают, ударяя пальцами по дну пробирки, и ставят в штатив на 5-10 мин. Это время необходимо для полного превращения гемоглобина в солянокислый гематин. Затем к содержимому пробирки добавляют по каплям дистиллированную воду до тех пор, пока цвет полученного раствора не будет совершенно одинаков с цветом стандарта боковых пробирок (добавляя воду - раствор перемешивают стеклянной палочкой).

Цифра, стоящая на уровне полученного раствора, показывает содержание гемоглобина в испытуемой крови.

Рекомендации к оформлению работы. Объясните принцип метода определения количества гемоглобина в крови.