Дослід 1. Визначення холестерину методом Ілька (з реактивом Лібермана-Бурхарда)

Тема 11. Обмін тригліцеролів та фосфоліпідів. Метаболізм холестеролу в організмі. Регуляція та патології ліпідного обміну.

Мета заняття:

Ø Умітихарактеризувати молекулярні механізми ліполізу і ліпогенезу, пояснювати гормональну регуляцію процесів;

Ø Уміти характеризувати основні шляхи синтезу фосфоліпідів в організмі людини;

Ø Уміти характеризувати основні етапи біосинтезу холестеролу, шляхи його біотрансформації, основні механізми регуляції обміну холестерину та причини розвитку його порушень.

Ø Уміти інтерпретувати результати визначення концентрації холестерину в крові для оцінки стану проміжного обміну ліпідів.

Теоретичні питання

1. Катаболізм триацилгліцеролів:

· біологічна роль;

· послідовність ферментативних реакцій;

· механізм регуляції активності триацилгліцеролліпази.

2. Біосинтез триацилгліцеролів:

· біологічна роль;

· метаболічні попередники;

· послідовність ферментативних реакцій.

3. Метаболізм фосфоліпідів і сфінголіпідів.Поняття про ліпотропні фактори.

4. Біосинтез холестеролу:

· біологічна роль;

· локалізація цього процесу;

· метаболічні попередники;

· етапи синтезу холестеролу;

· регуляція синтезу холестеролу;

5. Шляхи біотрансформації холестеролу.

6. Порушення обміну ліпідів при ожирінні, цукровому діабеті, жовчнокам’яної хворобі, атеросклерозі, сфінголіпідозах, жировому гепатозі.

7. Фармацевтичні препарати в корекції порушень обміну ліпідів.

Практична робота

Дослід 1. Визначення холестерину методом Ілька (з реактивом Лібермана-Бурхарда)

Принцип методу: холестерол за наявності оцтового ангідриду і суміші оцтової та сірчаної кислот утворює сполуку зеленого кольору. Кількість холестеролу визначають за інтенсивністю забарвлення за допомогою методу фотоколориметрії.

Хід роботи: визначення проводять у послідовності, яка подана в таблиці.

Примітка. Весь посуд повинен бути сухим.

Реактив	Дослідна проба, мл	Стандартна проба, мл
Робочий розчин (суміш крижаної оцтової кислоти, оцтового ангідриду і концентрованої сірчаної кислоти)	2,0	2,0
Стандартний розчинхолестерину	-	0,1
Сироватка крові	0,1	-
Перемішують струшуванням 10-12 разів і ставлять у термостат при t=370C на 20 хв.
На ФЕКу при λ=630-680 нм, червоний світлофільтр, товщина кювети - 5 мм, вимірюють значення екстинкції проти води

Розрахунок. Визначають концентрацію холестеролу за формулою

Е_д · С_ст

Х =,

Е_ст

де Х – вміст холестеролу в досліджуваній сироватці, мг/100 мл;

С_ст – концентрація холестеролу в стандартному розчині,

180 мг/100 мл;

Е_д – екстинкція (оптична густина) досліджуваної проби;

Е_ст – екстинкція (оптична густина) стандартного розчину;

Коефіцієнт перерахунку в одиниці СІ, ммоль/л, - 0,0258.

Клініко-діагностичне значення. У норміконцентрація холестеролу в сироватці крові становить 3,38 - 6,5 ммоль/л. Гіперхолестеролемія спостерігається при атеросклерозі, цукровому діабеті, механічній жовтяниці, гіпотиреозі. Гіпохолестеролемія – при анеміях, голодуванні, туберкульозі, гіпертиреозі, раковому виснаженні, паренхіматозній жовтяниці, гарячці, при введенні інсуліну.

Література

Основна:

1. Губський Ю.І. Біологічна хімія. – Київ-Тернопіль: Укрмедкнига, 2000. – 508 с.

2. Вороніна Л.Н., Десенко В.Ф., Мадієвська Н.Н. та ін. Біологічна хімія.- Харків.: Основа, 2000.-.608с.

3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П., Калинський М.І. Біохімія людини. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2002. – 744 с.

4. Клінічна біохімія/За ред.. Склярова О.Я. - Київ: Медицина, 2006. – 432 с.

5. Лекції, які читаються на кафедрі.

Додаткова:

1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина,1990. – 542 с.

2. Строев Е.А., Биологическая химия.М.:Высшая школа,1986. – 479с.

Завдання для самоконтролю

Завдання 1. При дослідженні ліпідограми крові встановлено, що в пацієнта значно підвищений вміст ЛПДНЩ і ЛПНЩ. Вміст ЛПВЩ у нормі. Який прогноз такого аналізу для пацієнта?

A. Схильність до кетозу

B. Погроза жирової дистрофії печінки

C. Схильність до ожиріння

D. Погроза атеросклерозу

E. Можливість розвитку жовчокам’яної хвороби

Завдання 2. В експерименті показано, що амфифільні властивості фосфоліпідів визначають їхню важливу роль у побудові біомембран. Який компонент обумовлює їх гідрофільність?

А. Ненасичені жирні кислоти

B. Гліцерин

С. Етаноламін

D. Насичені жирні кислоти

E. Сфінгозин

Завдання 3. При дослідженні складу мієлінових оболонок нервових волокон пацюків були виявлені цереброзиди. До якого класу ліпідів вони відносяться?

A. До гліцерофосфоліпідам

B. До глікосфинголіпідам

C. До триацилгліцеридам

D. До стероїдів

E. До аліфатичних спиртів

Завдання 4. При додаванні в їжу пацюкам гліцерину, що містить ¹⁴С, мітка виявляється в складі жирів і гліцерофосфоліпідів, тому що в синтезі цих речовин є загальні метаболіти. Назвіть їх.

A. 1,2-дифосфогліцерид

B. Холін

C. ЦДФ - етаноламін

D. Фосфатидна кислота

E. Метіонін

Завдання 5.

Правильність рішення перевірте, порівнявши їх з еталонами відповідей.

Еталони відповідей до рішення завдань для самоперевірки й самоконтролю вихідного рівня: Завдання 1 – D, Завдання 2 –С, Завдання 3 - В. Завдання 4 – D,

Завдання 5. Побудувати схему участі гліцеролу в реакціях анаболізму.

.