2017-12-16
1530
Величины Кi можно измерить различными методами, как экспериментально, так и при помощи расчетов.
Если известна только одна концентрация ингибитора, то константу ингибирования можно определить, используя графики в координатах Лайнуивера-Берка. Найдя кажущиеся и истинные значения константы Михаэлиса и максимальной скорости для двух графиков (в отсутствии и в присутствии ингибитора) и подставив эти значения в формулы (2), (4), (7), (9), (10).
Наиболее удобен для определения константы ингибирования метод Диксона. Этот простой графический метод позволяет определять Кi непосредственно. Если определять скорость реакции в условиях постоянной концентрации субстрата и различных концентраций ингибитора, то график зависимости 1/v от [I] будет представлять собой прямую (рис. 2.3.17).
Рис. 2.3.17. Графическое определение ингибиторных констант (метод Диксона). Во всех случаях S1˃S2
В этом случае для определения ингибиторной константы достаточно определить скорость реакции всего для двух концентраций субстрата.
ЛЕКЦИЯ 2.4
