Количественное определение витамина А

В 1937 г. из печени морских рыб был выделен витамин А2. Его биологическая активность составляет 40% активности ви­тамина А. Они имеют близкую молекулярную массу и хими­ческие свойства. Структурная формула витамина А2 отличается от витамина А тем, что в риононовом кольце имеется еще одна двойная связь, поэтому его называют дегидроретинолом.

Методы количественного определения ретинола ацетата основаны либо на реакции его с хлороформным раствором хлорида сурьмы (III) (фотоколориметрический метод), либо на измерении поглощения ультрафиолетовой части спектра спиртовых или хлороформных растворов витамина. ГФ X рекомендует спектрофотометрическое определение ретинола ацетата в спиртовом растворе. В этом случае измеряют оптическую плотность спиртового раствора препарата (приго­товленного из точной навески) на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 326 нм. При этой длине волны выполняют количественное определение. Раствором сравнения служит изопропиловый спирт. Расчёт содержания проводят по удельному показателю поглощения, который у ретинола ацетата равен 1530, а у ретинола пальмитата 956. Активность 1 мг ретинола ацетата соответствует 2907 МЕ, а 1 мг ретинола пальмитата — 1817 МЕ. Те же растворы ретинолов используют для спектрофотометрического определения поглощающих примесей. Измеряют их оптические плотности при 300, 310, 320, 326, 330, 340 и 350 нм, а затем каждую делят на величину оптической плотности при 326 нм. Полученные отношения не должны отличаться более, чем на ±0,03 от значений, приведённых в ФС. Используя сочетание метода ТСХ на пластинках Силуфол и УФ-спектрофотометрии, определяют наличие в ретинола пальмитате примеси ретинола (не более 3%). Измерение оптической плотности элюата, содержащего ретинол, выполняют при длине волны 326 нм.

Спектрофотометрическое количественное определение ретинола выполняют также в хлороформном растворе с использованием в качестве реактива 50%-ного раствора хлорной кислоты (при 543 нм). Спектрофотометрическое определение можно выполнять после превращения ретинола в ангидровитамин А (для дегидрирования используют n-толуолсульфокислоту).