А. Идентификация выделенной чистой культуры бактерий по биохимическим, антигенным и др. свойствам

Для этого производят следующие исследования:

а) изучение однородности роста на скошенном МПА;

б) приготовление, окраска мазка по Граму (или фуксином) и микроскопия для проверки чистоты выделенной на скошенном МПА культуры;

в) изучение биохимической активности бактерий: посев выделенной чистой культуры на среды Гисса (для определения сахаролитической активности), желатини МПБ с индикаторными бумажками на индол, аммиак и сероводород (для выявления протеолитической активности). Инкубация при 37^оС в течение 24 часов.

Примечание 1: изучение биохимических свойств проводят только при работе с чистой культурой бактерий. При этом определяют свойства каждого выделенного микроорганизма в отдельности. Если при микроскопии мазка из материала со скошенного МПА обнаруживается смесь бактерий, то процедуру выделения чистой культуры бактерий необходимо повторить.

Примечание 2: для адекватной оценки биохимической активности бактерий необходимо исследовать не менее 15-20 тестов!

Таблица 7. Ферментативные свойства бактерий

Предполагаемый возбудитель	САХАРОЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА	ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
Лактоза	Глюкоза	Мальтоза	Маннит	Сахароза	Индол	Сероводород

г) изучение антигенных свойств выделенных бактерий (будет проводиться в разделе:”ИНФЕКЦИЯ И ИММУНИТЕТ”).

Б. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Инкубация при37^оС в течение 24ч.

В. Внутривидовая идентификация выделенной чистой культуры бактерий (эпидемиологическое маркирование). Проводится часто с целью определения источника инфекции. С этой целью применяют фаготипирование, рестрикционный анализ, определение плазмидного профиля бактерий и др. исследования.

ЭТАП. Учет результатов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ: на основании изучения морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств бактерий, выделенных из исследуемого материала, можно сделать вывод об их принадлежности к виду __________________________ и виду ____________________________________.

Таблица 8. Определение количества бактерий в исследуемом материале (метод серийных разведений)

Разведение материала	10-	10-	10-
Засеваемый объем, мл	0,1	0,1	0,1
Результат (количество колоний):
Расчет:
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: количество бактерий в исследуемом материале _________________ КОЕ/мл

Таблица 9. Схема определения микробного числа воды

Разведение воды	1:10	1:100	1:1000
Засеваемый объем, мл
МПА, в мл
Результат (количество колоний):
Расчет:
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: микробное число исследуемой воды _________________КОЕ/мл

 

Таблица 10. Схема микробиологического исследования воздуха

Метод исследования	Место отбора проб воздуха	Время экспозиции	Объем исследуемой пробы воздуха	Описание колоний
Седиментационный (по Коху). Посев на МПА	· аудитория	5 минут	10 л
·	5 минут	10 л
Аспирационный (аппарат Кротова или ПУ-2). Посев на МПА, кровяной агар	аудитория	Устанавлива-ется автоматически	100 л
Расчет: количество бактерий (определено методом Коха) - количество бактерий (определено аспирационным методом) - количество грибов (по Коху или методом аспирации) -
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: микробное число исследуемого воздуха _________________КОЕ/м3, где количество бактерий - ________КОЕ/м3; количество грибов - _____ КОЕ/м3, что соответствует (не соответствует) установленным нормативам.

Рисунок 1. Культуральные свойства бактерий. Характер роста бактерий на жидких питательных средах

Пленка на поверхности (аэробы)

Придонный рост (микроаэрофилы)

Диффузный рост (факультативные анаэробы)

Рисунок 2. Культуральные свойства бактерий. Пигменты бактерий

Staphylococcus aureus

S. epidermidis

Micrococcus luteus

Pseudomonas aeruginosa

Serratia marcescens

 

Рисунок 3. Рост бактерий на среде Эндо

Лактозопозитивные бактерии

Лактозонегативные бактерии

 

Рисунок 4. Культивирование анаэробов (метод Фортнера)

Аэробы

Анаэробы

Занятие 7. Дата ______. Тема: «Бактериологический метод исследования (продолжение). Идентификация чистых культур бактерий по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам. Микрофлора человека»

_Мазок зубного налета

_____________________

 

Окраска ___________

 

Занятие 8. Дата ______. Тема: «Бактериологический метод исследования (продолжение). Ферменты бактерий. Идентификация чистых культур бактерий по биохимическим свойствам. Антибиотики. Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам»

Таблица 12. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений

Ингредиенты								контроль
МПБ, в мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
Пенициллин, ЕД/мл			0,5	0,25	0,125	0,06	0,03	--
Стафилококк	по одной “петле”
Результаты(рост/отсутствие роста):
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: минимальная ингибирующая концентрация (МИК) пенициллина____ЕД/мл

Таблица 13. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом диффузии в агар (методом дисков)

Вид бактерий	Антибиотик, диаметр зоны задержки роста, мм
цефалексин	доксициклин
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: выделенные бактерии вида _______________________ чувствительны к ________________________________________________, устойчивы к ____________________; выделенные бактерии вида________________ чувствительны к __________________________, устойчивы к ______________________________________________________.

 

Рисунок 5. Схема определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков

Антибиотики:

Ø Цефалексин

Ø

Ø

Ø

Занятие 9. Дата ______. Тема: «Генетика бактерий. Механизмы передачи генетической информации у бактерий. Генетические методы диагностики, применяемые в микробиологии. Принципы культивирования облигатных внутриклеточных паразитов»