2018-01-21
349
Занятие 6. Дата ______. Тема: «Принципы культивирования бактерий. Выделение и идентификация чистых культур бактерий. Культивирование анаэробов Дезинфекция, антисептика, стерилизация и асептика. Микрофлора воды и воздуха»
Таблица 4. Методы стерилизации и аппаратура
| Стерилизуемый материал | Метод стерилизации | Режим стерилизации |
| ü Инфекционный материал | Автоклавирование | 1,5-2 атм., 131оС, 20-25 мин. |
| ü Среды, не содержащие веществ, разлагающихся при 120оС ü Бактериальные фильтры | Автоклавирование | 1 атм., 120оС, 20 мин. |
| ü Среды, не выдерживающие нагревания до 120оС ü Мембранные фильтры | Автоклавирование | 0,5 атм., 110оС, 15-30 мин. |
| ü Среды, не выдерживающие нагревания выше 100оС | Дробная стерилизация | Текучий пар, 60оС, 3 раза по 30-40 мин., через сутки |
| ü Свернутая сыворотка, яичные среды | Аппарат Коха | До 65оС 3 раза по 45 мин., через сутки |
| ü Питательные среды и вещества, разрушающиеся при нагревании | Фильтрование через стерильные бактериальные фильтры: фильтры Зейтца, свечи Шамберлана или Беркефельда | Фильтрование |
| ü Колбы, пробирки, чашки Петри, пипетки и прочая стеклянная посуда и инструменты | Печь Пастера | 165-170оС, 45 мин. |
|
|
|
Таблица 5. Классификация питательных сред
| Группа питательных сред | Жидкие | Плотные |
| Основные (простые) | ||
| Простые среды | Мясо-пептонный бульон (МПБ) | Мясо-пептонный агар (МПА) |
| Специальные (сложные) | ||
| А. Сложные специальные | ¨ Сахарный МПБ для стрептококков и др. | ¨ Сахарный МПА ¨ 5% кровяной агар и др. |
| Б. Элективныеилиизбирательные (преимущественно растет определенный вид микроорганизмов, другие не растут или растут плохо) | ¨ 1% щелочная пептонная вода для холерного вибриона ¨ 10% желчный бульон для сальмонелл и др. | ¨ Желточно-солевой агар (ЖСА) для стафилококков ¨ Свернутая сыворотка для дифтерийной палочки ¨ Кровяной агар с ванкомицином для бактероидов и др. |
| В. Среды обогащения (всегда жидкие; используются для накопления микробов определенного вида) | ¨ Селенитовый бульон для дизентерийной палочки ¨ 10% желчный бульон для сальмонелл и др. | ________ |
| Г. Дифференциально-диагностические (применяются для первичной дифференциации бактерий преимущественно по биохимическим свойствам, а также для идентификации бактерий) | ¨ Среды Гисса (“пестрый ряд” для определения сахаролитической активности бактерий) | ¨ Среда Эндо ¨ Среда Левина ¨ Среда Плоскирева ¨ Среды Гисса (полужидкие) и др. |
| Д. Хромогенные (всегда плотные; применяются для дифференциации бактерий по культуральным свойствам) | ________ | ¨ «УриселектТМ» и др. |
| Е. Транспортные (для доставки исследуемого материала в лабораторию) | ¨ Среда Стюарта и др. | ¨ Среда Стюарта (полужидкая) и др. |
| Синтетические | ||
| -------- | ¨ Среда Сотона |
Протокол “ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ”
|
|
|
(бактериологический метод исследования)
1 ЭТАП. Посев исследуемого материала на чашки Петри с плотной питательной средой (МПА) методом штриха.
Инкубация при 37оС в течение 24 часов.
Примечание 1: в том случае, если в исследуемом материале содержится незначительное количество возбудителя (например, в крови), то его предварительно накапливают путем посева материала в жидкую питательную среду (см. среды обогащения), а затем после инкубации (как правило, при 37оС в течение 18-24 часов) производят пересев на плотную среду.
Примечание 2: выделение и идентификация чистой культуры анаэробов производится в анаэробных условиях.
2 ЭТАП. Идентификация выделенной чистой культуры (чистых культур) по культуральным, морфологическим и тинкториальным свойствам. Для этого проводят:
а) макро- и микроскопическое исследование колоний, выросших на плотной питательной среде (культуральные свойства);
б) приготовление мазка из половины колонии каждого вида и окраску препарата по Граму (морфологические и тинкториальные свойства);
Примечание: микроскопия материала из колоний производится также с целью проверки чистоты культуры.
в) пересев оставшейся части колонии на скошенный агар для накопления выделенной чистой культуры. Инкубация при 37оС в течение 24 часов.
Таблица 6. Схема описания колоний
| № | Размеры | Форма | Цвет | Поверхность | Края | Консистенция | Структура | Морфология; Окраска по Граму | Предполагаемый возбудитель |
ЭТАП.
