Задача 5. Описать методы определения концетрации вирионов

Для этого надо знать:

1. Проводят определение количества вирионов в 1 мл среды (титр вируса).

2. Используется 2 метода:

а) титрование по ЦПД: клетки культуры заражают 10-кратным разведением вируса; после 6-7-дневной инкубации просматривают на наличие ЦПД; за титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур; титр выражают количеством цитопатических доз (ЦПД₅₀);

б) метод "бляшек": культуру клеток заражают вирусом и покрывают тонким слоем агара, что ограничивает распространение вирусов после выхода их из клетки, и инфицируются только соседние клетки; после инкубирования посевов в течение нескольких суток на агаровом покрытии появляются "стерильные пятна" – просветленные участки определенной формы – участки погибших клеток в сплошном монослое клеточной культуры – "бляшки". Считается, что одна "бляшка" – потомство одной вирусной частицы; она хорошо заметна в виде светлого круглого участка на красном фоне клеток, прижизненно окрашенных нейтральным красным; титр вируса выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл. Размеры, форма и сроки появления отличаются у разных видов вирусов и штаммов, что используется для идентификации.