Термокаталитический метод

Метод основан на сорбировании паров алкоголя выдыхаемого воздуха с последующей термодесорбцией и сжиганием на элементах чувствительного детектора. Этот принцип реализуется с помощью прибора для определения паров спирта в выдыхаемом воздухе - ППС-1.

Конструкция прибора обеспечивает подогревание выдыхаемого воздуха и отбор для анализа пробы именно альвеолярного воздуха. Калибровка прибора производится с помощью генератора контрольных смесей ГС-1, производящего пароспиртовоздушные смеси с определенным содержанием в них алкоголя.

Прибор ППС-1 более чувствителен и точен в сравнении с качественными реакциями.

Инструкция по медицинскому применению прибора ППС-1 с описанием порядка работы и указанием критериев выявления паров алкоголя в выдыхаемом воздухе входит в комплект прибора.

Следует отметить, что термокаталитический метод, реализуемый с помощью прибора ППС-1, также, как и качественные пробы на алкоголь (Рапопорта, трубки Мохова - Шинкаренко и "Контроль трезвости"), неизбирателен по отношению к этиловому спирту. Указанные способы дают положительные результаты и при наличии в выдыхаемом воздухе ряда других летучих веществ, например, ацетона, эфиров, метанола. В связи с этим в практике экспертизы алкогольного опьянения перечисленные методы используются как предварительные пробы. Доказательное значение имеет лишь отрицательный результат качественных проб и исследований с помощью прибора ППС-1 или сочетание положительных реакций с клинической картиной опьянения. В ряде случаев у освидетельствуемого необходимо собирать на исследование жидкие биологические среды (мочу, слюну либо кровь) для проведения количественного определения алкоголя в них предпочтительно методом газовой хроматографии.

 

     3.3. Методы количественного определения алкоголя

  в жидких биологических средах.

Из жидких биологических сред при освидетельствовании для установления факта употребления алкоголя и алкогольного опьянения наиболее часто исследуются моча и слюна. Кровь для определения алкоголя может забираться только при наличии соответствующих медицинских показаний.

Оценивая результаты исследований, следует иметь в виду, что даже при одновременном отборе проб различных биологических жидкостей количество алкоголя в них может быть неодинаковым. Это обусловлено рядом причин:

- во-первых, плотностью среды, количеством в ней воды. В связи с гидрофильностью алкоголя, при равных условиях в среде с большим содержанием воды больше и алкоголя. Например, если определить концентрацию алкоголя в цельной крови, плазме и эритроцитарной массе из одной и той же пробы крови, то, соответственно, наибольшее количество алкоголя будет определено в плазме, меньшее в цельной крови и еще меньшее в эритроцитарной массе;

- во-вторых, имеет значение фаза опьянения. В фазе резорбции наибольшая концентрация алкоголя определяется в артериальной крови. В этой фазе алкоголь проникает из артериальной крови в ткани, и в венозной крови, оттекающей от тканой, его концентрация ниже. В фазе резорбции артериовенозная разница по алкоголю может достигать 0,6 град./оо. Что касается мочи, то ее проба из мочеточников содержит алкоголя столько же, сколько и омывающая почки кровь. Поскольку на практике для пробы отбирается пузырная моча, то концентрация алкоголя в ней зависит от времени отбора пробы и времени, предшествующего опорожнению пузыря, т.к. в пузыре идет постоянное смешивание порций мочи, поступающей в различные фазы опьянения. Тем не менее определенно известно, что в фазе резорбции концентрация алкоголя в пузырной моче всегда ниже, чем в крови. В фазе элиминации содержание алкоголя в моче может быть выше, чем в крови. И, наконец, после опьянения, когда в крови экзогенный алкоголь уже не обнаруживается, он все еще может определяться в моче.

Содержание эндогенного алкоголя в крови, согласно литературным данным, находится в пределах 0,008 - 0,4 ‰. Результаты определения эндогенного алкоголя зависят прежде всего от применяемого метода. При не избирательных к алкоголю способах, обладающих большой погрешностью измерения, например способе Видмарка, Никлу, фотоколориметрическом, максимальными уровнями эндогенного алкоголя в биологических жидкостях принято считать 0,3 - 0,4 ‰. При газохроматографическом исследовании в биологических жидкостях в зависимости от методики исследования эндогенного алкоголя определяют не более 0,02 - 0,07 ‰.

Результаты исследования во многом зависят от точности соблюдения методики пробоотбора биологической жидкости, условий хранения пробы и транспортировки, погрешности метода, ошибок при проведении исследований. С учетом сказанного обнаружение алкоголя в биологической жидкости в концентрации ниже 0,3 ‰ не может достоверно свидетельствовать о факте употребления алкоголя.

Забор биологических сред у лиц, освидетельствуемых для установления состояния алкогольного опьянения, должен проводиться в любое время суток.

Моча отбирается в сухой стерильный флакон из-под пенициллина "под пробку". Флакон тотчас же закрывают пробкой. Отбор пробы мочи должен производиться в условиях, исключающих подмену или замену ее другими жидкостями.

Слюна отбирается в стерильный сухой флакон из-под пенициллина в количестве 5 мл и тут же закрывается пробкой.

У всех флаконов с отобранными пробами фиксируют пробки алюминиевыми колпачками с помощью приспособления для обжима колпачков (ПОК-1), обеспечивающего герметизацию флакона, и ставят их в холодильник. В случае герметизации другим способом флаконы должны быть опечатаны. На каждый флакон наклеивается этикетка с указанием номера пробы (по регистрационной книге), даты, времени забора пробы, фамилии освидетельствуемого, фамилии медицинского работника, подготовившего пробу.

Перед отбором пробы крови в сухой стерильный флакон из-под пенициллина закапывают 1 - 2 капли гепарина или 0,8 мл 3,8%-го раствора цитрата натрия и встряхиванием флакона смачивают его стенки.

Кровь в количестве 5 мл отбирается пункцией кубитальной вены при строгом соблюдении асептических условий самотеком во флакон, обработанный гепарином или цитратом. Флакон тотчас же закрывают стандартной резиновой пробкой, фиксируют пробку и содержимое флакона перемешивают. Кожа в месте пункции предварительно обрабатывается раствором сулемы 1: 1000 или риванолом 1: 500. Дезинфекция кожи спиртом, эфиром, настойкой йода или бензином не допускается.

Данные о взятии мочи, слюны или крови заносятся в журнал регистрации анализов и их результатов (форма N 250/у). При этом указываются: порядковый номер, дата и время взятия мочи, крови или слюны; фамилия, имя, отчество врача, производившего взятие пробы крови (откуда взята кровь и способы обработки кожи), количество взятых биосред, дата и время передачи биосред на анализ, дата проведения исследования, результаты исследования. Листы регистрационного журнала должны быть пронумерованы, прошнурованы и скреплены сургучной печатью учреждения.

Пробы биологических сред следует хранить в холодильнике при температуре не ниже - 4 град. С.

В лабораторию пробы мочи, крови и слюны передаются с направлением, в котором указаны порядковый номер пробы (по регистрационной книге), наименование, количество, дата и время взятия биосред, условия хранения, цель анализа, Ф.И.О. направившего врача, адрес направившего учреждения.

Биосреды, как правило, должны исследоваться не позднее суток с момента их отбора. Допускается их хранение до исследования в холодильнике при температуре не ниже -4 град. С в течение 5 суток. При длительном хранении биосред с нарушением температурного режима хранения в них развиваются бродильные и гнилостные процессы, которые могут существенно исказить результаты количественного определения.

Часть исследуемой среды (из флакона) используют для определения этилового алкоголя, оставшуюся часть хранят в холодильнике для возможных контрольных исследований в течение 35 дней.

В настоящее время для количественного определения алкоголя в биологических жидкостях наиболее часто используются методы фотоколориметрии и газожидкостной хроматографии.

Первый из них недостаточно избирателен к алкоголю, обладает значительными погрешностями.

 Метод газовой хроматографии обладает более высокой специфичностью и точностью. Сегодняшняя практика такова, что наибольшее количество экспертиз приходится на определение этилового алкоголя газохроматографическим методом в крови и моче.

Среди известных хроматографических методик для определения алкоголя в биологических жидкостях к настоящему времени Минздравом рекомендованы к использованию две модификации нитритного метода.

 Сущность метода заключается в превращении спиртов в алкилнитриты, более летучие, чем спирты, и в дальнейшем хроматографировании алкилнитритов. Разделенные на хроматографической колонке компоненты смеси последовательно поступают в детектор по теплопроводности - катарометр, сигналы которого регистрируются в виде ряда хроматографических пиков на хроматограмме. Идентификация веществ производится по времени их удержания, которое исчисляется от момента введения анализируемого вещества в колонку до появления максимума пика. Чувствительность для этилового спирта составляет 0,01%. Расчет концентрации этилового алкоголя производят после калибровки по методу внутреннего стандарта. Внутренним стандартом служит изопропиловый спирт.

Исследования проводятся на газовом хроматографе "Цвет-165" с детектором по ионизации в пламени. Колонки - металлические, размером 300х0,3 см. Температура колонок-70°С, испарителя-150°С, скорость газа-носителя – 30 - 40 мл/мин. Выбранные сорбенты позволяют в одном термическом режиме определять сразу все вышеназванные вещества (за исключением метилового и изопропилового спиртов, которые определяются при более низкой температуре колонки).

Методика газохроматографического анализа состоит в следующем: биологические объекты помещаются во флаконы объемом 10 мл, добавляется 10% - ная фосфорно-вольфрамовая кислота (для осаждения белков) и безводный сульфат натрия или меди (для уменьшения парциального давления паров воды) герметично закрываются и нагреваются на кипящей водяной бане I5 минут. Парогазовая фаза объемом 2 мл отбирается шприцем из флаконов и вводится в испаритель хроматографа. Идентификация веществ проводится по относительным временам удерживания и не менее, чем на двух колонках.

Концентрацию этанола в крови (‰) на заданный момент определяют по формуле: Сх = Ct + βТ, где Сх — искомая величина, Ct концентрация этанола в крови на момент освидетельствования, β - величина снижения концентрации этанола в крови за 1 ч (‰), Т — временной интервал (ч). Установление степени алкогольного опьянения на заданный момент времени осуществляют с использованием табл. 1.

Таблица 1.

Концентрация этанола в крови ‰	Степень интоксикации
Менее 0,5	Практически трезв
0,5 – 1,5	Опьянение легкой степени
1,5 – 2,5	Опьянение средней степени
2,5 – 3,0	Опьянение сильной степени
Более 3,0	Тяжелая алкогольная интоксикация, опасная для жизни

 

Установление срока, прошедшего от момента принятия спиртных напитков до освидетельствования, и факта повторного приема спиртных напитков осуществляют с учетом анализа соотношения концентрации алкоголя в крови и моче. Нарастание концентрации этанола в крови, превалирование его содержания в крови над уровнем в моче указывает на фазу резорбции. Это означает, что алкоголь был принят не ранее чем за 1 - 2 ч до освидетельствования. Снижение концентрации этанола в крови в сочетании с высокой его концентрацией в моче (выше, чем в крови) свидетельствует о фазе элиминации, т.е. о том, что алкоголь был принят более чем за 2 — 3 ч до освидетельствования. Нарастание концентрации этанола в крови, сопутствующее высокой (больше, чем в крови) его концентрации в моче, характерно для повторного приема спиртных напитков.

 

   4. Диагностика (установление) степени алкогольного опьянения

  у умершего к моменту наступления смерти или незадолго до нее.

При судебно-медицинской экспертизе трупа эксперт нередко должен ответить на вопрос о степени алкогольного опьянения, в котором находился умерший незадолго до смерти. При этом эксперт чаще всего не располагает клиническими данными и решает этот вопрос лишь на основании количественного газохроматографического определения этанола в крови и моче трупа.

Количество этилового спирта, принятого в составе спиртных напитков, вычисляют по формуле: А = РrС0, где А искомая величина (в граммах 100 % алкоголя), Р — масса тела в кг), С0 — та концентрация алкоголя, которая установилась бы в крови, если бы весь спирт одновременно распределился по всему организму (вычисляется по приведенной выше формуле, где Т представляет интервал между принятием спиртных напитков и временем забора крови на исследование), r - фактор редукции, представляющий собой отношение концентрации этанола в организме (на единицу массы тела) к концентрации этанола в крови. Значение фактора редукции для мужчин в среднем составляет 0,68, женщин 0,55, для тучных людей - 0,55 - 0,65, астеничных — 0,70 — 0,75. Для более точного определения количества попавшего в организм алкоголя к полученному результату следует прибавить количество алкоголя, которое не успело из содержимого желудка всосаться в кровь или (и) адсорбировано пищей (дефицит алкоголя). Количество выпитых спиртных напитков рассчитывают с учетом их крепости (приводится в объемных процентах), имея в виду, что при концентрации 100% 100 г алкоголя соответствуют 123 мл. Установление срока, прошедшего от момента принятия спиртных напитков до освидетельствования, и факта повторного приема спиртных напитков осуществляют с учетом анализа соотношения концентрации алкоголя в крови и моче. Нарастание концентрации этанола в крови, превалирование его содержания в крови над уровнем в моче указывает на фазу резорбции. Это означает, что алкоголь был принят не ранее чем за 1 - 2 ч до освидетельствования. Снижение концентрации этанола в крови в сочетании с высокой его концентрацией в моче (выше, чем в крови) свидетельствует о фазе элиминации, т.е. о том, что алкоголь был принят более чем за 2 — 3 ч до освидетельствования. Нарастание концентрации этанола в крови, сопутствующее высокой (больше, чем в крови) его концентрации в моче, характерно для повторного приема спиртных напитков.

 

      5. Список используемой литературы.

1. Судебная медицина под ред. В. Н. Крюкова. – М.: Медицина, 1998.

2. Судебная медицина под ред. Ю. И. Пиголкина – М.: ГЭОТАР – Медиа, 2007.

3. Судебная медицина. Первомайский В.Б., Илейко В.Р. – М.: Медицина, 2006.

4. Судебная медицина. Ю.И. Пиголкин, Е.Х. Баринов, Д.В. Богомолов, И.Н. Богомолова - – М.: ГЭОТАР – Мед, 2005.

5. Судебная медицина. Курс лекций. Гурочкин Ю.Д., Витер В.И. – 2007.

6.Судебная медицина: Руководство для врачей / Под ред. А.А.Матышева. - 3-е изд., перераб. и доп. - СПб: Гиппократ, 1998.