Транспортировка и хранение проб

Получение проб для гистологического исследования.

Пробу для гистологического исследования также необходимо проводить как можно скорее после гибели животного, до аутолиза и деструкции клеток. Если нет возможности доставить материал в лабораторию в течение нескольких часов, его помещают в консервирующий раствор. С. С Кальтер уточняет условия, обеспечивающие оптимальное сохранение проб.

1) соотношение жидкости и ткани 20:1,

2) толщина пробы не более 0,5 см (длина и ширина не играют особой роли);

3) использование для пересылки проб сосудов с широким горлом.

Ни в коем случае нельзя замораживать ткани или использовать буру при консервации проб, предназначенных для гистопатологического исследования!

Хороший фиксирующий раствор получают при смешивании 50 мл формалина (40 % раствора формальдегида в воде) с 450 мл воды и 3,8 г поваренной соли. При отсутствии измерительных приборов и весов такой раствор можно приготовить, взяв 3 столовые ложки формалина, 0,5 л воды и чайную ложечку поваренной соли.

В качестве материала для гистологических исследований берут кусочки (размером в несколько кубических сантиметров) тех органов, которые имеют видимые отклонения от нормы (по форме, размеру, цвету, консистенции, наличию необычных образований); могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины болезни и предположительной избирательной локализации.

Пробы рекомендуется как можно быстрее поместить в условия, обеспечивающие замедление процессов инактивации вируса. Такие условия обеспечивают низкие температуры. Для этого пробирки (флакончики) с патматериалом, закрытые резиновыми пробками, надо поместить в термос с охлаждающей смесью (рис. 4, 5). В качестве охлаждающей смеси можно взять смесь равных частей сухого льда (твердой углекислоты) и этилового спирта (температура минус 71 °С держится несколько дней). Можно использовать смесь, состоящую из трех массовых частей льда или снега и одной массовой части поваренной соли. В последнем случае удается получить температуру минус 15 – минус 20 °С. Вместо замораживания можно использовать для консервирования химические средства (менее эффективно). Лучшим из последних считается смесь равных объемов стерильных глицерина и 0,85%-ного раствора поваренной соли (изотонический раствор), в которую и помещается патматериал. Обычно эту смесь используют для консервирования кусочков паренхиматозных органов и тканей. Растворы глицерина менее пригодны для вируссодержащих жидкостей, особенно в тех случаях, когда этот материал нужно вводить животным, эмбрионам и в культуру клеток в неразведенном виде. Употребление глицерина делает невозможным исследование патологического материала методом иммунофлюоресценции. Поэтому одновременно с пробой патматериала необходимо направлять мазки-отпечатки, приготовленные и фиксированные на предметном стекле, для исследования в люминесцентном микроскопе.

Рисунок 4. Схема упаковки проб вируссодержащего материала, первичная емкость: 1 – емкость, содержащая пробу, пробирка с завинчивающейся пробкой с нетоксичной резиновой прокладкой, обернутой лейкопластырем, или запаянная стеклянная ампула; внутренняя упаковка

Рисунок 5. Контейнеры для перевозки-пересылки вирусологических проб

В некоторых случаях возникает необходимость пересылки проб внутри обла­сти или страны, обмена пробами между диагностическими, научно-производ­ственными или научно-исследовательскими лабораториями. В этом случае ла­боратория, отправляющая материал, должна приготовить вируссодержащие пробы с максимальным титром. Это требование должно выдерживаться в случаях, если проводится идентификация вируса, если исходная лаборатория выделила вирус, но не в состоянии его идентифицировать, а другая лаборатория используется в качестве справочной для проведения полной идентификации. Вирус иногда удобно бывает послать в форме инфицированных культур кле­ток, которые не требуют сильного охлаждения. Культуры клеток должны быть предохранены от резких колебаний температур изолирующими материалами. Чтобы предупредить повреждение клеток от вспенивания, пробирка или пузы­рек должны быть полностью заполнены средой. Особое внимание необходимо обратить на то, чтобы пробки были нетоксичными, тщательно пригнанными и исключали утечку. Упаковка для радиоактивно­го меченого вируса или проти­вовирусных антител должна от­вечать требованиям, предъяв­ляемым к перевозке радиоактив­ных материалов, при этом адек­ватный поглощающий материал должен действовать в качестве изолирующего средства, обеспе­чивающего медленное охлажде­ние пробы снаружи.

Рисунок 6. Предупреждающая этикетка для обозначения инфекционных субстанций, включая вирусные

Сопроводительная к пересылаемому материалу должна иметь четкую марки­ровку (рис. 6). Указывают: фамилию и адрес грузоотправителя, фамилию и адрес грузополучателя. Эти два пункта должны быть четко разграничены; тамо­женную декларацию снабжают: предупреждающей этикеткой или этикеткой, рекомендованной ВОЗ для использования при меж­дународных перевозках; при пересылке меченых материалов – соответствую­щей этикеткой, предупреждающей о радиоактивной опасности. Могут потребо­ваться и другие этикетки типа «Срочно, не задерживать» или «Хранить в про­хладном месте». Внутрь упаковки должны быть вложены дополнительная эти­кетка с описанием деталей материала, сопроводительный лист или перечень со­держимого этой упаковки.

Задания:

1) получение смывов слизистых оболочек дыхательных путей телят, овец или других животных;

2) получение фецес;

3) консервация полученных материалов;

4) этикетирование;

5) приготовление из вируссодержащей ткани суспензии вируса;

6) подготовка смывов, полученных от животных, для вирусологического исследования.