Подбор параметров

Висновки

Рекомбінантний білок

Очищення білків

Створення рекомбінантних білків

Експресійний вектор трансформується в бактерії

Бактерії виростають до насичення

Compound added for induction

e.g., IPTG

Білки накопичується в бактерії

Після лігування білок-кодуючі послідовності в вектор експресії, наступним кроком є трансформація бактерій. Бактерії містять білки, які контролюються індукованим промотором. Бактерії можуть рости до рівня насичення, не роблячи ніяких рекомбінантних білків. Як тільки вони досягають насичення, що викликають молекули, такі як IPTG доданий. Ця молекула викликає активує промотер, і рекомбінантний білок починає накопичуватися в бактеріях.

Contents of bacteria run over column??

Білкові мітки зв’язуються з колонками

Приклади:

Nickel column for His-tagged proteins

Anti-myc antibody column for Myc-tagged proteins

Елюювання дає очищення білків

На наступному етапі рекомбінантного білка виробництва, бактерії лізуються, а витягнутий білок запускається через колонку. Визначені рекомбінантні білки зв'язуються з колонкою. У разі His-мічених білків, як показано на слайді, стовпець містить нікель, який буде пов'язувати позитивно заряджені його залишки. Для FLAG-або Myc-мічених білків, стовпець містить антитіла, специфічні до FLAG- чи Myc епітопа. Після того, змиваючи всі незв'язані білки, рекомбінантні білки вимивається з колонки, отримуючи відносно чистий білок.

Гель-електрофорез рекомбінантного білка показує наступне:

-розчинні білки

-проточні колонки

-очищені білки

Чотири фракції з колонки

В експерименті показано на цьому слайді, рекомбінантні білки индуцировали і стовпці очищають. Витягнутий білки були розділені гелем-електрофорезом на акриламідному гелі. Перша смуга є аліквоти суміші білків, перш ніж він був поставлений на колонку. Друга полоса є аліквоти білки, які не дотримуються ("текли через") стовпця. Зверніть увагу, що структура білків у другому ряді з'являється майже ідентичні, що в першій смузі. Інші аліквоти фракцій білків елюіруют з колонки. Чим вище молекулярна вага групи білка, нижня смуга, ймовірно, деградовані форми білка.

Бібліотеки

Гібридизація і Нозерн блот

Субклонування

Рестрикційно-ферментне картування

Секвенування

ПЛР

Білкова експресія

Таким чином, ми обговорювали різні рекомбінантні ДНК-методи, які формують основу для технологій геноміки. Методи ми розглянули включати покоління геномних і кДНК бібліотек, гібридизації з використанням Нозерн блот, субклонування, рестрикційно-ферментне картування секвенування ДНК, полімеразна ланцюгова реакція, і рекомбінантна експресія білків.

Основной командой для решения оптимизационных задач в Excel является команда Данные/Подгруппа Работа с даннями/ Подбор параметра. Эта команда определяет неизвестную величину, приводящую к требуемому результату.

Для работы с командой Подбор параметра необходимо подготовить лист, чтобы в листе находились:

формула для расчета;

пустая ячейка для искомого значения;

другие величины, которые используются в формуле.