Определение количества гемоглобина (НЬ) в крови колориметрическим методом

Оснащенте: то же, что для работы №1, а также гемометр Сали.

Содержание работы. Определяют уровень НЬ в крови колориметрическим методом (color - цвет), основанном на сравнении цвета исследуемого раствора с цветом стандартного, содержащего известную концентрацию вещества. Для этого используется гемометр Сали, состоящий из темного стекла (при определении должна быть обращена к свету). В штатив вставлены три пробирки одинакового диаметра. Средняя градуированная пробирка пустая, в нее наливают исследуемый раствор. Две крайние пробирки запаяны. В них находится стандартный раствор хлорида гематина, содержаший 167 г/л (І6,7г%) гемоглобина и являющийся эталоном.

В среднюю пробирку налить пипеткой до метки «0» 0,1 N раствор HC1, Скарификатором сделать укол мякоти пальца, набрать кровь в пипетку для взятия крови точно до поперечной полосы (20 мл), после чего конец пипетки вытереть ватой, следя за тем, чтобы верхний мениск крови был точно на уровне метки. Пипетку опустить на дно пробирки и осторожно выдуть кровь, чтобы верхний слой хлористоводородной кислоты остался неокрашенным Это нужно делать быстро во избежание свертывания крови. Содержимое пробирки встряхивать, ударяя пальцем по ее концу, и помешивать палочкой. Переход НЬ в хлорид гематина совершается медленно, поэтому пробирку с исследуемой кровью поместить в гемометр и выжидать 5-10 мин. Лишь по истечении этого срока раствор гематина в пробирке развести дистиллированной водой, накапывая ее из пипетки до тех пop, пока цвет не сравняется со стандартным. Последние капли добавлять очень осторожно. Каждый раз, добавив каплю воды, жидкость в пробирке тщательно перемешивать стеклянной палочкой которую, чтобы сохранить объем взятой крови, вынимают только перед окончательным отсчетом, когда окраска хлорида гематина станет такой же, как окраска стандартного раствора. При этих условиях количество гематина, а следовательно, и НЬ определяют по уровню жидкости в градуированной пробирке. Цифры на средней пробирке гемометра, стоящие на уровне нижнего мениска полученного раствора гематина, показывают абсолютное содержание НЬ в исследуемой крови.

Примечание. Для приготовления 0,1 N раствора HC1 берут 8,2 мл концентрированной HC1 (отн. плотность 1,19) и разводят дистиллированной водой до 1 л.

Оформление протокола. 1. Записать результаты исследования. 2. Сделать вывод о соответствии данного результата норме; 3. Определить клиническое значение гемометрии.

Лабораторная работа № 3.