Стерилизации и других микробиологических целей

Термостат – прибор для поддержания постоянства температуры - применяют для выращивания культур микроорганизмов. Он представляет собой шкаф (рисунок 1), в котором поддерживается в течение длительного времени определенная температура. Оптимальная температура для размножения многих микроорганизмов 37 ºС. Термостаты бывают суховоздушными и водяными.

Сушильный шкаф (печь Пастера) используют для стерилизации сухим жаром посуды, инвентаря и сухих материалов, например крахмала, мела (рисунок 2). Стерилизуемый материал предварительно заворачивают в бумагу и помещают в шкаф так, чтобы он не касался стенок. Стерилизацию проводят при температуре 160 ºС в течение двух часов. Поднимать температуру выше 180 ºС не рекомендуется: ватные пробки и бумага начинают разрушаться (буреют, становятся ломкими). Простерилизованный материал вынимают после отключения и охлаждения шкафа, лучше, когда температура в шкафу сравняется с комнатной.

Прибор для счета колоний (рисунок 3) - полуавтоматический счетчик, снабженный электропером с пружинным устройством, предназначенный для счета колоний бактерий в чашках Петри. Чашку
Петри с колониями бактерий устанавливают вверх дном на растровое стекло. Легкий нажим электропера на участке дна чашки Петри, соответствующем положению колонии, оставляет на стекле метку. При этом держатель поднимается вверх, цепь замыкается, и показания счетчика увеличиваются на единицу. Отсчет количества колоний бактерий производится путем вычисления разности показаний импульсного счетчика до начала отсчета и после его окончания.

Автоклав (рисунок 4) – толстостенный аппарат, предназначенный для стерилизации посуды и питательных сред паром под давлением. Это герметичный котел с двойными металлическими стенками и крышкой. Пространство между стенками (водопаровая камера) заполняется водой. Внутренняя часть (стерилизационная камера) снабжена манометром, предохранительными клапанами и краном для спуска воды и пара. Для создания герметичности автоклав плотно закрывается крышкой с резиновой прокладкой. Применяют для стерилизации питательных сред под давлением от 0,5 до 1,0 МПа в течение 20…30 минут.

1 – корпус; 2 – термометр; 1 – крышка; 2 – корпус;

3 – дверца; 4 – потенциометр; 3 – редуктор; 4 – блок управления;

5 – тумблер; 6 – лампа; 5 – маркировка; 6 – термометр

7 – вентиляционные отверстия

Рисунок 1 – Термостат Рисунок 2 - Сушильный шкаф

1 – столик для чашки Петри; 2 – перо с пружинным устройством;

3 – показатель счетчика; 4 – тумблер для включения импульсного счетчика; 5 – тумблер для включения лампы освещения счетчика

Рисунок 3 - Прибор для счёта колоний микроорганизмов

1 – стерилизационная камера; 2 – кран для выхода воздуха;

3 – манометр; 4 – предохранительный клапан;

5 – водопаровая камера; 6 – воронка для заполнения автоклава водой;

7 – отверстия для поступления пара в стерилизационную камеру;

8 – крышка; 9 – подставка для размещения стерилизуемых материалов

Рисунок 4 – Горизонтальный (а) и вертикальный (схема) (б) автоклавы

1 – крышка; 2 – дно

Рисунок 5 - Чашка Петри

Холодильники используются в микробиологических лабораториях для хранения культур микроорганизмов, питательных сред, сывороток и прочих биологически активных препаратов при температуре около 4 ºС. Для сохранения биопрепаратов при температуре ниже 0 ºС используются низкотемпературные холодильники, в которых поддерживается температура минус 20 ºС и ниже.

Аппарат Коха применяют для стерилизации питательных сред, разрушающихся при температуре выше 100 ºС. Он представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном и конусообразной крышкой, которая имеет отверстие для выхода пара. Аппарат покрыт теплоизолирующим материалом (асбестом или линолеумом). Сосуды с питательными средами ставят на подставку с отверстиями, находящуюся внутри аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта их с паром. Обработка стерилизуемого материала в аппарате Коха производится в течение трех дней по 30 минут ежедневно. В перерывах между стерилизацией среду помещают на двадцать четыре часа в термостат при 28…30 ºС.

Центрифуги применяются для осаждения микроорганизмов и других клеток, для разделения неоднородных жидкостей (эмульсии, суспензии). В основе метода центрифугирования лежит принцип отделения крупных частиц с большей плотностью при низких скоростях. При повышении скорости центрифуг можно осадить все более мелкие частицы.

Микроанаэростат - аппарат для выращивания микроорганизмов в анаэробных условиях.

4.2 Посуда и инструменты, применяемые
в микробиологической лаборатории

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: пробирках, колбах или чашках Петри. В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Жидкой средой для аэробных культур заполняют обычно пробирки, для анаэробных - . При выращивании микроорганизмов в колбах используют только жидкие питательные среды. Для культивирования аэробных микроорганизмов среду наливают тонким слоем (например, 30 мл в колбы Эрленмейера на 100 мл), для выращивания анаэробных микроорганизмов колбу заполняют на . Пробирки и колбы также используют для хранения питательных сред. Чашки Петри (рисунок 5) применяют для выращивания культур микроорганизмов на плотных питательных средах. Они имеют высоту около 1,5 см и диаметр около 8…10 см (диаметр крышки несколько больше, чем диаметр нижней чашки).

При помощи пипеток проводят пересев жидких культур микроорганизмов. Бродильные трубки используют для определения активности брожения по газообразованию.

Для работы с микроорганизмами используют специальные бактериологические иглы, петли и шпатели (рисунок 6). Их изготавливают из платиновой проволоки, которую закрепляют в специальных металлических держателях или впаивают в стеклянные палочки. Толщина игл и петель не должна превышать 0,5 мм, шпателя – 1,5 мм и более. При посевах (и пересевах) культур микроорганизмов из колоний, выросших на плотных средах, применяются иглы или шпатели. Шпатели также используют для взятия клеток микроорганизмов из колоний, врастающих в субстрат, и для размазывания жидких культур на поверхности плотной питательной среды. Суспензии микроорганизмов берут петлей.

При приготовлении препаратов микроорганизмов предметные стекла удерживают на весу пинцетами Корнэ или специальными пинцетами-держателями. Сушить препараты целесообразно на верхнем ярусе сушильного металлического столика Коха. Промывать их удобно на приспособлениях – перекладинах или на так называемых препаратодержателях – параллельно расположенных стеклянных палочках, соединенных резиновыми трубками (длина палочек от 20 до 30 см, трубок от 15 до 20 см). Палочки устанавливают над фарфоровыми чашками или ваннами.