2015-03-27
681
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
Высшего и профессионального образования
«Оренбургский государственный аграрный университет»
Кафедра микробиологии
И.В. Савина
Гибридомные технологии.
Методы получения моноклональных антител
Методические указания для студентов, обучающихся по специальности «Микробиология», «Ветеринария»
Оренбург
Автор: И.В. Савина.
Методическое указание к теме, предназначенной для самостоятельного изучение: «Гибридомные технологии. Методы получения моноклональных антител»
Рецензент: доцент кафедры эпизоотологии и паразитологии С.В. Селин
Методические указания обсуждены на заседании методической комиссии факультета Ветеринарной медицины ОГАУ и рекомендованы к опубликованию (протокол № от «» «» 2011г.)
ВВЕДЕНИЕ
Моноклональные антитела являются мощным инструментом исследования биологических макромолекул. С их помощью изучают структуру и функции ранее открытых молекул, а также выявляют новые компоненты клеток и тканей.
Анализ экспрессии и регуляции генов, идентифицированных в различных геномных проектах, требует создания тысяч и тысяч новых моноклональных антител. Моноклональные антитела позволяют обеспечить высокую специфичность, чувствительность и воспроизводимость приемов иммуноанализа и в то же время -увеличить их разнообразие и адаптировать для решения проблем фундаментального и практического характера. Поэтому создание моноклональных антител для систем иммуноанализа было и остается актуальной задачей.
Опубликование в 1975 году статьи, в которой было описано слияние нормальных плазмацитов с их опухолевыми аналогами - клетками миеломы и последующий отбор клонов-продуцентов антител, открыло эру создания, исследования и использования моноклональных антител. Совокупность приемов получения штаммов-продуцентов моноклональных антител была основана на гибридомной технологией. В ее основе лежит синтез ряда достижений клеточной биологии, фундаментальной иммунологии и экспериментальной онкологии.
Перспективность гибридомной технологии для развития методов иммуноанализа была высоко оценена исследователями, и лаборатории многих стран мира занялись ее освоением и адаптацией. Вскоре стало понятно, что на каждом этапе создания гибридом имеются многочисленные технические проблемы и что способ их решения определив результат в целом. Первая из таких проблем связана с высокой зависимостью миеломных клеток-партнеров от ростовых факторов эмбриональной сыворотки. Создание клеточных линий, менее зависимых от экзогенных ростовых факторов, способных расти и давать жизнеспособные гибриды в средах, не содержащих фетальной сыворотки, представляло актуальную задачу. Вторая проблема состояла в том, что при создании гибридом для иммунизации почти повсеместно использовали мышей BALB/c, от которых происходят миеломные штаммы-партнеры. Это приводило к сужению спектра эпитопов, распознаваемых полученными моноклональными антителами. Представлялось целесообразным в качестве доноров иммунных лимфоцитов использовать животных иного генотипа с иным репертуаром вырабатываемых антител с тем, чтобы получаемые моноклональные антитела по эпитопной специфичности могли дополнять ранее созданные реагенты. Наконец, пассирование гибридом на животных с целью получения больших количеств моноклональных антител остается до сих пор «узким местом» гибридомной технологии.
Таким образом, совершенствование ряда ключевых этапов гибридомной технологии представляет собой актуальную задачу.
